miR-221靶向PTEN介导PI3K/AKT信号通路调节细胞自噬参与帕金森病的机制研究

目的探讨微小RNA-221(miR-221)靶向磷酸脂酶与张力蛋白同源物基因(PTEN)介导磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB也称AKT)信号通路调节细胞自噬参与帕金森病(PD)进展的机制研究。方法采用6-羟基多巴胺(6-OHDA)作用于肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞建立PD模型;转染miR-221模拟物或抑制剂来调节miR-221的表达;细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测PC12细胞存活率;电镜观察自噬体;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析确定miR-221的表达;蛋白印迹法(Western blot)检测自噬蛋白标志物(LC3-II)和PTEN/PI3K/AKT信号蛋白的表达。结果在PD细胞模型中,miR-221的表达水平下降(P0.01),LC3-II蛋白表达水平上调(P0.01),自噬体增加;与6-OHDA组相比,过表达miR-221降低了LC3-II蛋白的表达水平(P0.05),并增加了细胞存活率(P0.001),而沉默miR-221增加了LC3-II蛋白的表达水平(P0.05),并降低了细胞存活率(P0.001);此外,与6-OHDA组相比,过表达miR-221降低了PTEN蛋白的表达(P0.01),增加了PI3K蛋白的表达(P0.001)以及AKT蛋白磷酸化程度(P0.01),而沉默miR-221增加了PTEN蛋白的表达(P0.01),降低了PI3K蛋白的表达(P0.05)以及AKT蛋白磷酸化程度(P0.05)。结论 miR-221在6-OHDA诱导的PC12细胞中表达降低,上调miR-221可靶向PTEN介导PI3K/AKT信号通路来调节自噬,从而发挥对PD细胞模型的保护作用。