| 斑马鱼mcm3合子基因敲除实验模型的构建与鉴定 |
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| 引用本文： | 夏佳敏,张可,陈炳宇,黄四洲,刘敏.斑马鱼mcm3合子基因敲除实验模型的构建与鉴定[J].成都医学院学报,2021,16(4):409-414. |
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| 作者姓名： | 夏佳敏 张可 陈炳宇 黄四洲 刘敏 |
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| 作者单位： | 成都医学院 基础医学院 成都 610500;成都医学院 发育与再生四川省重点实验室 成都 610500;成都医学院 人体解剖与组织胚胎学教研室 成都 610500;成都医学院 发育与再生四川省重点实验室 成都 610500;成都医学院第一附属医院 成都 610500 |
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| 摘 要： | 目的 构建斑马鱼mcm3合子基因突变体,研究mcm3合子基因在斑马鱼胚胎早期发育中的作用.方法 利用系统发育树分析不同物种间mcm3基因的保守性;利用国家生物技术信息中心(NCBI)网站及Jalview软件序列比对,分析斑马鱼MCM3蛋白与人类MCM3蛋白之间的氨基酸同源性;用CRISPR/Cas9技术构建可稳定遗传的斑马鱼mcm3合子基因缺失突变体;提取胚胎的基因组DNA后进行基因测序,检测斑马鱼mcm3合子基因突变类型;利用原位杂交检测mcm3突变体中mcm3 mRNA的表达水平.结果 斑马鱼合子基因mcm3与人类mcm3基因同源,且高度保守;可稳定遗传的mcm3合子基因突变体成功构建;在mcm3突变体斑马鱼中,胚胎从第3天开始出现头和眼睛,其外部表型较野生型斑马鱼小,且mcm3纯合子胚胎在第8天后相继死亡;运用整胚原位杂交发现,mcm3在野生型斑马鱼的头部、眼睛、中后脑边缘、鳃、胸腺及内胚层组织中高表达,但在mcm3突变体斑马鱼中,mcm3 mRNA的表达水平明显降低.结论 斑马鱼mcm3基因缺失突变体成功构建,并且mcm3基因在斑马鱼的早期胚胎发育中起重要作用.
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| 关 键 词： | 斑马鱼 mcm3 突变体 CRISPR/Cas9 |
Construction and Identification of Zebrafish mcm3 Zygote Gene Knockout Experimental Model |
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| Authors: | Xia Jiamin Zhang Ke Chen Bingyu Huang Sizhou Liu Min |
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