| 摘 要： | 目的建立超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)检测人血清哇巴因的方法。方法采用高特异性的UPLC-MS/MS,以氘标记的哇巴因-d3作为内标。样本采用固相萃取(SPE)前处理方法,以反相色谱柱负离子模式及电喷雾电离源(ESI)检测血清哇巴因水平。对建立的方法进行方法学(基质效应、回收率、准确度、批内精密度、批间精密度及稳定性)验证。采用建立的UPLC-MS/MS方法检测20名体检健康者及40例高血压患者血清哇巴因水平,并与酶联免疫吸附试验(ELISA)进行比较。结果 UPLC-MS/MS检测血清哇巴因的标准曲线范围为0.02～5.0 ng/mL,最低定量检测限(LLOQ)为0.02ng/mL。采用ABN固相萃取小柱进行样本前处理的基质效应较小,且回收率较高,达85%。LLOQ和低值(0.06 ng/mL)、中值(0.6 ng/mL)、高值(4 ng/mL)质控品的准确度分别为108.0%、89.2%、101.0%、103.0%。3个水平质控品的批内变异系数(CV)分别为2.87%、1.95%、0.56%,批间CV分别为5.98%、1.90%、0.75%。样本室温过夜放置16 h及样本前处理后室温放置自动进样器48 h的偏差均15%。采用UPLC-MS/MS检测哇巴因,正常对照者及高血压患者血清中均未检测到哇巴因。采用ELISA测定血清哇巴因,高血压患者为0.096 ng/mL,正常对照者为0.062 ng/mL。UPLC-MS/MS检测5个水平(0.02、0.05、0.10、0.20、0.50 ng/mL)的哇巴因标准品,其测定结果与对应的哇巴因标准品浓度呈正相关,且线性较好(r20.99),准确度较高;而ELISA检测5个水平哇巴因标准品的结果均很接近(0.024 9～0.029 6 ng/mL)。结论建立了检测人血清哇巴因的UPLC-MS/MS方法,未检测到正常人及高血压患者的血清哇巴因。UPLC-MS/MS与ELISA检测血清哇巴因的结果存在较大差异。
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