细粒棘球蚴Eg95全长基因的克隆与在甲醇酵母中的表达

目的 了解我国新疆细粒棘球绦虫表膜蛋白Eg95的全长基因结构及尝试其在甲醇酵母中表达。方法 PCR从细粒棘球蚴头节DNA中扩增含有全长编码区序列(cds)的基因，克隆到T载体中测序。再亚克隆到pMETαA中，构建不带6个组氨酸标签的重组质粒，转化甲醇酵母，分析Eg95全长基因的表达。结果 成功扩增了细粒棘球蚴绦虫1262bp的Eg95全长基因，含有两个内含子，外显子核苷酸序列与Genbank中细粒棘球绦虫Eg95 cds完全—致，但扩增的基因与已知的其他Eg95全长基因存在差别。1μg重组质粒的表达盒转化甲酵酵母PMD16，获得了Eg95基因重组工程酵母10个，其中非同源重组子3个。甲酵诱导非同源重组酵母特异表达出了分子量约为17kDa与Eg95cds编码蛋白接近的蛋白。酵母培养上清SDS-PAGE未见该蛋白条带出现，表达的蛋白可能主要位于酵母表面。结论 克隆到Eg95属于—个基因家族的成员之—，其基因编码区高度保守，含有内含子的全长基因同样可在酵母中进行表达。

Cloning the Echinococcus grannulosus Eg95 Complete Gene and Expressing in Yeast Pichia methanolica