剂量依赖性热休克处理对肺癌细胞增殖凋亡的影响

目的:研究热休克反应在肺癌细胞GLC-82增殖过程中的的作用。方法:采用体外培养人肺癌细胞株GLC-82,并进行增殖实验,将细胞随机分为热休克组和非热休克组,每组再分为4组,对照组,肿瘤细胞坏死因子25μg/L组,肿瘤细胞坏死因子50μg/L组,肿瘤细胞坏死因子100μg/L组。采用吖啶橙荧光染色观察细胞的凋亡情况;采用四甲基偶氮噻唑盐比色法检测肿瘤细胞的细胞增殖情况;以3H-胸腺嘧啶脱氧核苷掺入试验检测肿瘤细胞的DNA合成情况。每项实验中各组均设5个复孔用于统计分析。主要观察肿瘤坏死因子α对体外GLC-82细胞的细胞毒性作用及热休克对此作用的拮抗作用。热休克对肺癌细胞GLC-82凋亡及对GLC-82DNA合成影响。结果:①肿瘤坏死因子α对体外GLC-82细胞的细胞毒性作用及热休克对此作用的拮抗作用:非热休克组随着肿瘤坏死因子α浓度升高,反应细胞生长抑制率的吸光度值呈明显下降趋势;而热休克组细胞在同样浓度的肿瘤坏死因子刺激作用下,吸光度值下降趋势缓慢,生长抑制作用减弱,表明热休克可拮抗肿瘤坏死因子α对体外GLC-82细胞的细胞毒性作用,促进细胞增殖。②热休克所致肺癌细胞GLC-82凋亡的镜下观察结果:肿瘤细胞经吖啶橙染色后胞核染成黄绿色,胞浆和核仁的RNA为橘红色。加入肿瘤坏死因子α后,细胞呈现凋亡改变。凋亡细胞的荧光镜下特点为:细胞膜及核膜完整;细胞核染色质凝集浓染,呈单个或多个圆球形或月牙形凝集于核膜;细胞体积明显缩小,荧光强度增强,胞膜不断出芽、脱落,细胞变成数个大小不等的内膜包囊的凋亡小体。③热休克对肺癌细胞GLC-82的凋亡作用:经热休克处理后,凋亡细胞数量比较非热休克组明显减少,并与肿瘤坏死因子α呈剂量依赖关系,肿瘤坏死因子α浓度为100μg/L时,热休克组凋亡指数明显低于非热休克组犤(9.40±2.12),(16.70±5.19),P<0.01犦。④热休克对肺癌细胞GLC-82DNA合成的影响:在非热休克组细胞中,随着肿瘤坏死因子α的浓度增加,闪烁计数率逐渐减低,表明细胞DNA合成就减少;而热休克组细胞在不同浓度的肿瘤坏死因子α作用下,闪烁计数率均比非热休克组增高,表明DNA合成增多,表明热休克拮抗肿瘤坏死因子α的细胞毒作用,而对细胞GLC-82的生长起促进作用。结论:热休克组细胞比非热休克细胞凋亡指数明显降低,细胞生长抑制率明显增高,闪烁计数率值升高,DNA合成增多,热休克明显抑制肿瘤坏死因子α的细胞毒作用,拮抗凋亡作用而促进细胞生长增殖,而且其作用有剂量依赖性。

Influence of dose-dependent heat shock on proliferation and apoptosis of pulmonary carcinoma cells