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细胞骨架改构在LPS作用后VE-Cad胞吞途径转化中的作用
作者姓名:张晔  张连阳  谭浩  孙士锦  李阳
作者单位:第三军医大学大坪医院野战外科研究所全军战创伤中心创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室
基金项目:“十二五”国家科技支撑计划(项目编号:2012BAI11B01);军队“十二五”重点项目(项目编号:BWS12J033)~~
摘    要:目的探索细胞骨架解聚剂细胞松弛素D(Cyt D)和稳定剂Jasplakinolide(Jasp)通过改构细胞骨架结构对LPS作用后网格蛋白/微囊介导的血管内皮细胞钙黏蛋白(VE-Cad)胞吞、膜VE-Cad表达和血管通透性的影响。方法采用CRL-2922细胞进行实验,各组均于组别对应的时点检测(空白对照组任意时点皆可)。1将细胞分为空白对照组、LPS-1 h组及LPS-4 h组,观察细胞骨架。2将细胞分为LPS-1 h组、Cyt D+LPS-1 h组、LPS-4 h组及Jasp+LPS-4 h组,检测网格蛋白/Cav1与VE-Cad共沉淀和膜VE-Cad的表达水平。3将细胞分为空白对照组、LPS-1 h组、Cyt D+LPS-1 h组、LPS-4 h组及Jasp+LPS-4 h组,检测单层细胞的累积荧光透过率。结果 1空白对照组中肌动蛋白呈均匀散在分布,细胞骨架无明显的聚合;LPS-1 h组中细胞骨架发生明显的聚合,张力丝形成;LPS-4 h组中细胞骨架解聚,张力丝消失。2与LPS-1 h组比较,Cyt D+LPS-1 h组中网格蛋白与VE-Cad的共沉淀水平较低(P<0.05),Cav1与VE-Cad的共沉淀水平较高(P<0.05),且膜VE-Cad的表达水平降低(P<0.05);与LPS-4 h组比较,Jasp+LPS-4 h组中网格蛋白与VE-Cad的共沉淀水平的差异无统计学意义(P>0.05),Cav1与VE-Cad的共沉淀水平较低(P<0.05),且膜VE-Cad的表达水平升高(P<0.05)。3与空白对照组比较,LPS-1 h组和LPS-4 h组的累积荧光透过率均较高(P<0.05);与LPS-1 h组比较,Cyt D+LPS-1 h组的累积荧光透过率较高(P<0.05);与LPS-4 h组比较,Jasp+LPS-4 h组的累积荧光透过率较低(P<0.05)。结论 LPS作用后细胞骨架先发生聚合然后解聚,这种改构促使VE-Cad胞吞途径从由网格蛋白介导转化到由微囊介导。

关 键 词:脂多糖  血管内皮细胞钙黏蛋白  网格蛋白  微囊  细胞骨架  血管通透性
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