比格犬ERβ1293 基因真核载体的构建及其在HEK293T细胞中的表达和定位

目的 观察比格犬Myc 标签ERβ₁₂₉₃重组真核表达载体在HEK293T细胞中的表达及定位。方法 以pEGFP-N1-ERβ₁₂₉₃重组真核表达载体为模板，PCR保真酶扩增得到ERβ₁₂₉₃基因编码区全长。Myc标签ERβ₁₂₉₃重组真核载体瞬时转染HEK293T细胞，运用蛋白质印迹技术（Western blotting）和间接免疫荧光技术（indirect immunofluorescence， IF）鉴定pcDNA3.1-Myc-ERβ₁₂₉₃在HEK293T细胞中的表达和定位情况。结果 成功构建pcDNA3.1-Myc-ERβ₁₂₉₃重组真核表达载体，转染至HEK293T细胞中。Western blotting检测有蛋白条带表达，共聚焦显微镜下观察IF处理后的转染细胞，荧光定位于细胞质。结论 前期实验得到比格犬ERβ剪切异构体ERβ₁₂₉₃编码区序列，缺失第四外显子，导致其与配体结合能力减弱或消失，因此目的基因编码蛋白定位在细胞中发生变化。