| 应用抑制性消减杂交技术克隆丙型肝炎病毒 E2蛋白反式调节基因 |
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| 引用本文： | 白桂芹,成军,刘妍,杨倩,黄艳萍,蔺淑梅,杨瑗,张树林. 应用抑制性消减杂交技术克隆丙型肝炎病毒 E2蛋白反式调节基因[J]. 胃肠病学和肝病学杂志, 2005, 14(4): 327-330 |
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| 作者姓名： | 白桂芹 成军 刘妍 杨倩 黄艳萍 蔺淑梅 杨瑗 张树林 |
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| 作者单位： | 解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室,北京,100039 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金攻关项目（C39970674,C39900130） |
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| 摘 要： | 目的应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建丙型肝炎病毒(HCV)E2蛋白反式调节基因差异表达的cDNA消减文库,克隆HCVE2蛋白反式调节相关基因。方法以HCVE2表达质粒pcDNA3.1(-)_E2转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为对照,制备转染后的细胞裂解液,从中提取mRNA并逆转录为cDNA,经RsaI酶切后将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性聚合酶链反应(PCR)扩增,将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析。结果成功构建人HCVE2蛋白反式调节基因差异表达的cDNA消减文库。文库扩增后得到78个阳性克隆,进行菌落PCR分析,均得到100～1000bp插入片段。挑取38个含有插入片段的阳性克隆测序分析,获得35个已知基因序列和3个未知基因。通过生物信息学分析获得其全长序列,其功能正在研究中。结论应用SSH技术成功构建了HCVE2反式调节基因差异表达的cDNA消减文库。该文库的建立为进一步阐明HCVE2反式调节的靶基因及致慢性肝脏疾病发生的分子生物学机制提供理论依据。
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| 关 键 词： | 丙型肝炎病毒 E2蛋白 抑制性消减杂交 新基因 |
| 文章编号： | 1006-5709（2005）04-0327-04 |
| 收稿时间： | 2004-04-20 |
| 修稿时间： | 2004-04-20 |
Cloning of genes transactivated by hepatitis C virus E2 protein by suppression subtractive hybridization technique |
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| BAI Guiqing,CHENG Jun,LIU Yan,YANG Qian,Huang Yanping,LIN Shumei,YANG Yuan,ZHANG Shulin. Cloning of genes transactivated by hepatitis C virus E2 protein by suppression subtractive hybridization technique[J]. Chinese Journal of Gastroenterology and Hepatology, 2005, 14(4): 327-330 |
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| Authors: | BAI Guiqing CHENG Jun LIU Yan YANG Qian Huang Yanping LIN Shumei YANG Yuan ZHANG Shulin |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Hepatitis C virus E2 protein Suppression subtractive hybridization Cloning |
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