EV71亚单位VP1的原核表达、纯化及免疫原性分析 |
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引用本文: | 胡琼文,谢婷婷,马永平.EV71亚单位VP1的原核表达、纯化及免疫原性分析[J].现代预防医学,2014(24):4478-4481. |
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作者姓名: | 胡琼文 谢婷婷 马永平 |
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作者单位: | 重庆医科大学分子与肿瘤研究中心(生物化学与分子生物学教研室) |
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基金项目: | 国家自然科学基金项目:基于双歧杆菌表达系统的EV71亚单位口服活疫苗研究(NSFC 30972585) |
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摘 要: | 目的原核表达并纯化人肠道病毒71型(EV71)亚单位VP1蛋白,分析其免疫原性。方法采用PCR技术扩增EV71 VP1(AB204852.1)基因序列,构建重组质粒p ET32a(+)-VP1并转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达6×His-VP1融合蛋白,将表达的蛋白用Ni2+-NTA树脂纯化、TGE液复性后免疫新西兰大白兔,制备抗VP1的抗血清,用间接ELISA法检测抗血清效价。结果重组工程菌p ET32a(+)-VP1/BL21(DE3)高效表达了相对分子质量约为42 k D的VP1融合蛋白,蛋白经纯化复性后免疫新西兰大白兔所得抗血清效价大于1︰625 000。结论原核表达系统p ET32a(+)/BL21(DE3)能高效表达EV71亚单位VP1融合蛋白,蛋白经纯化复性后具有良好的免疫原性,为进一步研制以双歧杆菌为抗原载体的新型疫苗奠定了基础。
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关 键 词: | 人肠道病毒71型(EV71) VP1融合蛋白 原核表达 免疫原性 |
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