| 双特异性CAR-T细胞对EGFRvⅢ+/CD133+胶质瘤干细胞的靶向杀伤 |
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| 作者姓名： | 刘亚丹 谢甲贝 朱琼琼 卢文杰 丁辉 韩双印 |
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| 作者单位： | 1. 河南省第二人民医院 消化内科，河南 郑州 451191；2. 郑州大学人民医院消化内科，河南 郑州 450003 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（No. 81772670） |
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| 摘 要： | 目的：制备双特异性CAR-T(bs CAR-T)细胞，观察其对表达表皮生长因子Ⅲ型突变阳性(EGFRvⅢ+，简称vⅢ+)和CD133+胶质瘤干细胞的靶向杀伤作用。方法：基于前期研制的vⅢ/CD133双特异性微抗体和二代CAR构建的双特异性CAR(bs CAR)，制备慢病毒载体转染人外周血T细胞，FCM和WB法检测bs CAR转染效率和表达水平。bs CAR-T细胞和vⅢ+/CD133+U87胶质瘤干细胞共培养，乳酸脱氢酶(LDH)释放实验、IFN-γ分泌实验检测其特异性杀伤作用和对IFN-γ分泌的促进作用。制备裸鼠vⅢ+/CD133+U87干细胞移植瘤模型检测bs CAR-T细胞对移植瘤生长的抑制作用。结果：vⅢsc Fv和CD133sc Fv通过重叠PCR无缝连接入二代CAR表达框(S-vⅢscFv/CD133scFv-Hinge-TM-CD137-CD3ζ)中，然后克隆入p CDH-MSCV-MCS-EF1-copGFP载体的Eco RⅠ和Bam HⅠ位点(pbs CAR)。3种质粒(p VSV...
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| 关 键 词： | 表皮生长因子Ⅲ型突变体 CD133 双特异性CAR vⅢ+/CD133+U87胶质瘤干细胞 肿瘤干细胞 |
| 收稿时间： | 2022-12-15 |
| 修稿时间： | 2023-02-10 |
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