| 日本血吸虫候选疫苗原肌球蛋白的表达载体构建、原核表达及免疫原性研究 |
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| 引用本文： | 贺宽耀,陈惠,崔书建,韩泽广,刘锋. 日本血吸虫候选疫苗原肌球蛋白的表达载体构建、原核表达及免疫原性研究[J]. 现代检验医学杂志, 2010, 25(2): 15-18. DOI: 10.3969/j.issn.1671-7414.2010.02.005 |
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| 作者姓名： | 贺宽耀 陈惠 崔书建 韩泽广 刘锋 |
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| 作者单位： | 1. 华东理工大学生物工程学院,上海,200237
2. 国家人类基因组南方研究中心,上海,201203 |
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| 基金项目： | 国家重大科技专项项目，上海市科委"启明星"计划 |
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| 摘 要： | 目的 将日本血吸虫原肌球蛋白基因(tropomyosin)克隆到原核表达载体pET-28a(+)裁体上,在BL-21(DE3)型大肠埃希菌中表达其产物,并对其进行免疫原性分析.方法 从日本血吸虫的Expressed Sequence Tag(EST)文库中筛选出包含tropomyosin全长基因的EST,然后用高保真酶PCR扩增,构建到pET-280(+)裁体上,最终在BL-21(DE3)型大肠埃希菌中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IFTG)诱导表达.表达的his-tropomyosin融合蛋白用镍螯舍树脂蛋白纯化柱(Ni-NTA resin)亲和层析纯化,得到纯度较高的tropomyosin后,通过Western Blotting技术,用感染日本血吸虫的兔血清作为天然抗体来研究tropomyosi的免疫原性.结果 pET-28a(+)-tropomyosin重组质粒在BL-21(DE3)型大肠埃希菌中成功表达,使用SDS-PAGE分析得到实际Mr约为40 000的his-tropomyosin融合蛋白,Ni-NTA resin的纯化效果很明显,获得的相对纯的目的 蛋白经过Western BIotting方法 检潮显示:tropomyosin融合蛋白能够与感染日本血吸虫6 w的兔血清有较强的免疫反应.结论 Tropomyosin能够在BL-21(DE3)型大肠埃希菌中高效表达,且抗原免疫原性强,日本血吸虫感染的兔血清能够识别体外表达的tropomyosin,具有与天然的tropomyosin相同的免疫原性.
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| 关 键 词： | 日本血吸虫 原肌球蛋白 原核表达 免疫原性 |
Cloning and Expression of Schistosoma Japonicum Tropomyosin Protein in Escherichia coli and Its Immunogenicity Analysis |
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| HE Kuan-yao,CHEN Hui,CUI Shu-jian,HAN Ze-guang,LIU Feng. Cloning and Expression of Schistosoma Japonicum Tropomyosin Protein in Escherichia coli and Its Immunogenicity Analysis[J]. Journal of Modern Laboratory Medicine, 2010, 25(2): 15-18. DOI: 10.3969/j.issn.1671-7414.2010.02.005 |
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| Authors: | HE Kuan-yao CHEN Hui CUI Shu-jian HAN Ze-guang LIU Feng |
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