| 小鼠原代海马神经元培养方法优化及HT22-GRK2-/-细胞构建 |
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| 引用本文： | 郭梦慧,薛娜娜,袁溪,孟浅,魏伟.小鼠原代海马神经元培养方法优化及HT22-GRK2-/-细胞构建[J].安徽医科大学学报,2023(4):589-596. |
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| 作者姓名： | 郭梦慧 薛娜娜 袁溪 孟浅 魏伟 |
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| 作者单位： | 安徽医科大学临床药理研究所抗炎免疫药物教育部重点实验室安徽省抗炎免疫药物协同创新中心 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(编号：82101311、81973332)； |
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| 摘 要： | 目的 探究并优化新生小鼠海马神经元体外原代培养方法；构建小鼠海马神经元HT22细胞中G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)基因敲除细胞株(HT22-GRK2-/-)。方法 为优化小鼠原代海马神经元的培养，取新生1～2 d C57BL6/J小鼠海马组织，经胰酶消化后吹打形成细胞悬液，于Neurobasal-A培养基中加细胞培养添加剂维持细胞生长。利用CRSIPR/Cas9基因编辑技术构建HT22-GRK2-/-细胞株，并通过免疫荧光染色和Western blot检测GRK2敲除效率。结果 以3×107/孔密度接种的新生小鼠原代海马神经元以无血清培养方式接种于6孔板中，可获得纯度高、活性好的小鼠原代海马神经元细胞；HT22-GRK2-/-细胞株构建成功。结论 成功建立并优化小鼠海马神经元体外原代培养方法，利用CRSIPR/Cas9基因编辑技术成功构建HT22-GRK2-/-细胞株。
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| 关 键 词： | 海马神经元 原代培养 HT22 GRK2 CRSIPR/Cas9 |
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