磷酸二酯酶4D纯合子敲除小鼠的构建

目的 应用CRISPR/Cas9技术构建磷酸二酯酶4D(PDE4D)纯合子敲除小鼠,为深入探究PDE4D基因的功能及作用机制提供基础。方法 针对PDE4D基因外显子4,5号构建载体显微注射到C57BL/6J小鼠受精卵中,经过母本繁育和子代交配获得PDE4D^-/-小鼠,通过PCR产物测序及基因型鉴定技术测定小鼠基因型。使用超声成像系统和HE染色检测小鼠主要器官形态和功能的变化,通过Westernblot实验验证PDE4D蛋白在小鼠体内的表达情况。结果 PDE4D^-/-小鼠基因型稳定遗传,小鼠体型较小,体内主要器官无明显形态及组织学改变。PDE4D杂合或纯合敲除小鼠主要组织中PDE4D表达减少或基本不表达,敲除效果较好。结论本课题利用CRISPR/Cas9技术成功建立了PDE4D^-/-小鼠,未发现明显生理异常,可用于以PDE4D为靶点的疾病发病机制及药物研究。