多重qPCR检测疟原虫方法的建立及应用评价

目的 建立一种能检测4种疟原虫多重qPCR(multiplex quantitative real-time polymerase chain reaction)方法,并对其进行临床应用评价。方法 以4种疟原虫18S rRNA基因作为靶序列,在保守区域设计双侧扩增引物,根据4种疟原虫特异性区域分别设计荧光探针,建立多重qPCR检测方法,并测试其特异性、敏感性,同时应用该方法对疟疾或疑似疟疾的临床血样进行检测。结果 建立检测4种疟原虫多重qPCR方法具有良好的特异性与敏感性,检测下限可达10拷贝/μl。该方法对浙江省2020年—2021年115份疟疾或疑似疟疾的临床血样进行检测,结果与疟疾分子诊断参考方法巢式PCR一致,临床特异度与敏感度均为100%。结论 本研究所建立的检测4种疟原虫多重qPCR方法简单快速、特异性好、敏感性高,可应用于疟疾临床病原诊断和参比实验室样本复核。