| 结核杆菌分泌蛋白Ag85A基因的克隆、表达及其诊断价值 |
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| 引用本文： | 吴雪琼,张俊仙,王安生,张妍,周文强,郑冬燕,何菊芳,张涛. 结核杆菌分泌蛋白Ag85A基因的克隆、表达及其诊断价值[J]. 广东医学, 2002, 23(12): 1258-1259 |
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| 作者姓名： | 吴雪琼 张俊仙 王安生 张妍 周文强 郑冬燕 何菊芳 张涛 |
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| 作者单位： | 中国人民解放军第309医院结核病研究中心,北京,100091 |
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| 基金项目： | 总后勤部卫生部科学基金资助项目(编号:2002-12) |
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| 摘 要： | 目的：获得重组抗原85A(rAg85A)，研究其免疫学特性，评价其在结核病血清学诊断中的价值。方法：应用基因工程技术克隆、表达、纯化Ag85A蛋白，通过Western印迹分析其抗原性。分别以结核分支杆菌纯蛋白衍生物（PPD）或纯化的rAg85A蛋白为抗原，通过酶联免疫吸附试验（ELISA）及结核病一步检测血清中抗结核抗体。结果：重组质粒pET30a-Ag85A测序表明与报道的序列相同。它在大肠杆菌BL21(DE3)细胞内以包涵体形式存在，表达量占菌体总蛋白的2％左右，Western印迹分析它与抗结核分支杆菌多克隆抗体具有良好的免疫反应性。纯化的rAg85A样品纯度约85％左右，每100ml培养菌可获得2mg左右的重组蛋白。以33例正常人血清的OD值 2s为正常界限值，一步法的特异性和敏感性分别为87.9％和65.6％；PPD分别为93.9％和62.5％；rAg85A分别为93.9％和15.6％。结论：pET30a-Ag85A大肠杆菌工程菌能以包涵 体形式表达rAg85A蛋白，该蛋白具有较高的抗原特异性，但检测抗结核抗体的灵敏度低。
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| 关 键 词： | 克隆 诊断 抗原 Ag85A基因 结核分支杆菌 基因表达 结核病 酶联免疫吸附试验 |
| 修稿时间： | 2002-07-15 |
Cloning, expression and diagnostic value of gene for Ag85A protein of mycobacterium tuberculosis |
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