| EBV特异性CTL相关TCR Vα-pIRES-TCR Vβ重组质粒的构建及体外表达 |
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| 引用本文： | 吴秀丽,李扬秋,朱康儿,杨力建,陈少华.EBV特异性CTL相关TCR Vα-pIRES-TCR Vβ重组质粒的构建及体外表达[J].免疫学杂志,2008,24(4):412-416. |
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| 作者姓名： | 吴秀丽 李扬秋 朱康儿 杨力建 陈少华 |
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| 作者单位： | 1. 暨南大学医学院血液病研究所,广州,510632
2. Ernst-Moritz-Arndt大学血液和肿瘤中心,Greifswald 17487,德国 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划)
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广东省自然科学基金
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血液病学国务院侨办重点专科基金 |
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| 摘 要： | 目的 构建EBV特异性细胞毒T细胞(CIL)相关的TCR Vα-pIRFS-TCR Vβ真核双表达质粒.方法 通过RT-PCR和基因扫描技术分析EBV特异性CTL克隆的T细胞受体(TCR)Vα和Vβ谱系表达情况及T细胞克隆性,确定其优势表达的TCR Vα15和TCR Vβ1亚家族基因的核苷酸序列(包括CDR3互补决定区),PCR扩增出TCR Vα15和TCR Vβ1基因后,分别定向克隆入真核双表达载体pIRES,构建双顺反子重组质粒TCR Vα-pIRES-TCR、Vβ,转基因技术将其转染A549细胞和Molt4细胞,通过RT-PCR、实时定量PCR、流式细胞术和蛋白印迹分析检测TCR Vα15和TCR Vβ1基因的表达.结果 酶切分析和核酸序列测定证实重组质粒构建正确,转染重组质粒的细胞能够表达TCR Vα15和TCR Vβ1的mRNA及蛋白.结论 成功构建了EBV特异性的TCR Vα-pIRES-TCR Vβ双顺反子真核表达质粒,并在体外实现了共表达,为进一步的实验研究奠定了基础.
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| 关 键 词： | EBV 转染 细胞毒T细胞 双顺反子 |
Construction and expression of bicistronic eukaryotic expression plasmid TCR Vα-pIRES-TCR Vβ of EBV-specific CTL |
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| WU Xiu-li,LI Yang-qiu,ZHU Kang-er,YANG Li-jian,CHEN Shao-hua,Grzegorz K. Przybylski.Construction and expression of bicistronic eukaryotic expression plasmid TCR Vα-pIRES-TCR Vβ of EBV-specific CTL[J].Immunological Journal,2008,24(4):412-416. |
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| Authors: | WU Xiu-li LI Yang-qiu ZHU Kang-er YANG Li-jian CHEN Shao-hua Grzegorz K Przybylski |
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