腺病毒介导的人端粒酶反转录酶牙周膜细胞系的建立 |
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引用本文: | 孙贵军,秦晓东,王世琴,胡慧珍,陆笑颜,金佳佳,吴生荣,何祥一.腺病毒介导的人端粒酶反转录酶牙周膜细胞系的建立[J].华西口腔医学杂志,2019,37(1):25-30. |
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作者姓名: | 孙贵军 秦晓东 王世琴 胡慧珍 陆笑颜 金佳佳 吴生荣 何祥一 |
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作者单位: | 兰州大学口腔医学研究所,兰州,730000;中国农业科学院兰州兽医研究所,兰州,730000 |
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基金项目: | 甘肃省自然科学基金(17JR5RA217) |
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摘 要: | 目的 通过腺病毒法建立稳定表达外源性人端粒酶反转录酶(hTERT)基因的牙周膜细胞系,以构建腺病毒介导的高效、稳定的hTERT牙周膜细胞系。方法 聚合酶链反应(PCR)法扩增hTERT基因编码序列,构建同源重组腺病毒质粒pAd-pshuttle-cmv-hTERT,收集腺病毒颗粒后感染人牙周膜细胞,实时荧光定量PCR检测hTERT及成骨相关基因碱性磷酸酶、核心结合因子2、骨涎蛋白、骨钙素、骨桥素、Ⅰ型胶原蛋白mRNA的表达水平,茜素红染色观察成骨分化能力,CCK-8检测细胞增殖能力。结果 成功构建了含hTERT基因的腺病毒颗粒并感染牙周膜细胞,感染细胞与正常牙周膜细胞形态相似;实时荧光定量PCR结果显示hTERT及成骨相关基因在感染细胞中高表达;茜素红染色显示牙周膜细胞系成骨能力强;CCK-8结果示牙周膜细胞系增殖能力强。结论 通过腺病毒法成功建立了过表达hTERT的人牙周膜细胞系,其具有较强的成骨分化能力,这为研究牙周膜再生机制提供了一个理想的细胞系。
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关 键 词: | 牙周膜细胞 人端粒酶反转录酶 腺病毒 稳定表达 成骨分化 |
收稿时间: | 2018-01-11 |
修稿时间: | 2018-05-09 |
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