人胆固醇酯水解酶基因慢病毒载体构建及鉴定

目的构建含有人胆固醇酯水解酶（hCEH）基因的慢病毒表达载体pLenti6．3-hCEH-IRES-EGFP，为hCEH基因治疗缺血性脑卒奠定基础。方法应用聚合酶链反应方法扩增目的片段，在目的基因进行上、下游分别加上PacI和AscI两个酶切位点，经双酶切后，转化入感受态DH5d细胞中，通过筛选获得重组质粒。将目的基因片段和pLenti6.3-IRES-EGFP载体连接，获得慢病毒表达载体pLenti6．3-hCEH—IRES-EGFP，并进行测序。抽提慢病毒载体，转染293T细胞，包装病毒，测定病毒滴度。结果目的基因与慢病毒表达载体pLenti6．3-IRES-EGFP连接，慢病毒表达载体pLenti6．3-hCEH—IRES-EGFP构建与预期相匹配，包装细胞293T呈绿色荧光。结论成功构建了携带hCEH基因的慢病毒载体。