竹叶总黄酮通过抑制Nox4减轻H_2O_2诱导的成骨细胞氧化损伤

目的探究抑制烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(Nox4)表达后竹叶总黄酮对H2O2诱导的成骨细胞氧化损伤的减轻作用。方法 M3T3-E1成骨细胞培养后分为5组,正常组、损伤组、药物处理组、空白转染组、Nox4转染组。收集细胞上清液,采用酶联免疫法测定超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)含量,DCFH-DA荧光探针法检测活性氧(ROS)含量。钙结节染色、碱性磷酸酶(ALP)染色观察细胞成骨能力;MTT法检测M3T3-E1细胞活力;流式细胞仪检测M3T3-E1细胞凋亡情况;Western blot检测Nox4蛋白的表达。结果与正常组、药物处理组、NOX4转染组比较,损伤组、空白转染组SOD含量降低,MDA、LDH、ROS含量升高。ALP染色显示,损伤组成骨细胞大量损伤,数量明显减少,药物处理组、NOX4转染组细胞损伤程度明显降低,数量有所增加。茜红素染色显示,损伤组细胞钙结节数量减少,药物处理组、NOX4转染组细胞钙结节数量增多。与损伤组、空白转染组比较,药物组、NOX4转染组ALP活性升高。MTT显示,损伤组细胞活力明显降低,药物处理组、NOX4转染组细胞活力升高。流式细胞仪结果显示,损伤组、空白转染组细胞出现大量凋亡,药物处理组、NOX4转染组凋亡程度较轻。Western blot显示,药物处理组、Nox4转染组M3T3-E1细胞Nox4蛋白相对表达量明显降低。结论竹叶总黄酮对H_2O_2诱导的成骨细胞氧化损伤具有一定的保护作用,其机制可能与抑制Nox4蛋白表达有关。

Total flavone of bamboo leaves alleviated the oxidative damage induced by H_2O_2 by inhibiting Nox4