| 人生物素基因的原核表达及纯化 |
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| 引用本文： | 杨霄鹏,郭建巍,吕同德,范兰芳.人生物素基因的原核表达及纯化[J].兰州医学院学报,2007,33(3):12-16. |
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| 作者姓名： | 杨霄鹏 郭建巍 吕同德 范兰芳 |
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| 作者单位： | [1]兰州军区兰州总医院临床实验科,甘肃兰州730050 [2]解放军第325医院门诊部,青海西宁810000 |
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| 摘 要： | 目的构建生物素原核表达载体，获取同源性、可溶性、高纯度的重组生物素融合蛋白，为生物素的深入研究及肿瘤的早期诊断奠定基础。方法从胃癌细胞中提取RNA，经RT-PCR扩增，克隆出生物素基因；用BamHⅠ和HindⅢ对生物素DNA和载体pET32进行双酶切，构建pET32．生物素重组质粒；将重组质粒转化BL21感受态细胞，通过氨苄青霉素抗性、PCR和重组质粒双酶切筛选重组子转化菌落，经DNA测序及BLAST比对，确认生物素基因序列正确性以及插入pET32质粒的位点和方向；用IPTG诱导表达，Western-Blotting鉴定。用Ni2＋金属螯合层析柱纯化重组融合蛋白。结果通过RT-PCR。经1％的琼脂糖凝胶电泳检测，扩增的生物素DNA片段与预期大小一致。经双酶切及DNA测序鉴定，生物素DNA定向插入了pET32质粒。用重组质粒转化大肠杆菌BL21、诱导表达和纯化目的蛋白。经Western．Blotting鉴定。所诱导的蛋白为重组生物素融合蛋白。结论成功构建了生物素基因原核表达载体，表达和纯化了生物素融合蛋白。
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| 关 键 词： | 生物素 基因 融合表达 纯化 |
| 文章编号： | 1000-2812（2007）03-0012-05 |
| 修稿时间： | 2007-05-14 |
Expression and purification of survivin protein |
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| YANG Xiao-peng, Guo Jian-wei, LU Tong-de, FAN Lan-fang.Expression and purification of survivin protein[J].Journal of Lanzhou Medical College,2007,33(3):12-16. |
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| Authors: | YANG Xiao-peng Guo Jian-wei LU Tong-de FAN Lan-fang |
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| Institution: | 1. Department of Clinical Laboratory, Lanzhou General Hospital, Lanzhou Command, PLA, Lanzhou 730050, China; 2. Department of Out-patient, No. 325 Hospital of PLA, Xining 810000, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | survivin gene fusion expression purification |
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