| 利用慢病毒载体构建稳定干扰β-catenin的人胚胎干细胞系 |
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| 作者姓名： | Sun Y Zeng SC Lu GX Lin G |
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| 作者单位： | 孙懿 (中南大学生殖与干细胞工程研究所//人类干细胞国家工程研究中心//卫生部人类干细胞与生殖工程重点实验室,湖南长沙,410078) ; 曾思聪 (中南大学生殖与干细胞工程研究所//人类干细胞国家工程研究中心//卫生部人类干细胞与生殖工程重点实验室,湖南长沙,410078) ; 卢光琇 (中南大学生殖与干细胞工程研究所//人类干细胞国家工程研究中心//卫生部人类干细胞与生殖工程重点实验室,湖南长沙,410078) ; 林戈 (中南大学生殖与干细胞工程研究所//人类干细胞国家工程研究中心//卫生部人类干细胞与生殖工程重点实验室,湖南长沙,410078) ; |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金,国家863计划项目,高等学校博士学科点专项科研基金新教师基金资助项目,湖南省自然科学基金青年基金,中央高校基本科研业务费青年教师助推基金 |
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| 摘 要： | 目的建立β-catenin稳定干扰的人胚胎干细胞系。方法利用β-catenin慢病毒干扰质粒PLKO.1-puro-β-catenin转染包装细胞293FT制备重组慢病毒,并感染人胚胎干细胞,采用嘌呤霉素筛选稳定表达shβ-catenin人胚胎干细胞克隆;试验分为稳定转染β-catenin干扰质粒组(Shβ-catenin)、稳定转染空白载体组(VECTOR)和对照未感染组(WT)三组,RT-PCR检测干扰后β-catenin mRNA表达;进一步免疫荧光检测干扰后细胞β-catenin和OCT4的蛋白表达。结果β-catenin特异性shRNA的慢病毒感染人胚胎干细胞后,获得稳定表达shβ-catenin的人胚胎干细胞系,Shβ-catenin组β-catenin mRNA表达明显降低,只有WT组mRNA表达的1%,而VECTOR组和WT组之间无明显差异;免疫荧光染色进一步验证shβ-catenin组中基本无β-catenin蛋白的表达,但表达多能性标记OCT4。结论通过β-catenin特异性shRNA慢病毒载体构建了稳定干扰β-catenin的人胚胎干细胞系。
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| 关 键 词： | 人胚胎干细胞 RNA干扰 β-catenin |
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