B型肉毒毒素轻链荧光表达细胞模型的构建及应用

目的 构建B型肉毒毒素轻链（BoNT/B,BLC）荧光表达细胞模型，并用于小分子化合物效应评价。方法 将BLC基因导入荧光表达载体pEGFP-N1中，构建重组质粒，并将其转染至神经细胞系Neuro-2a细胞中进行表达，通过荧光显微镜观察细胞内BLC-EGFP蛋白荧光表达水平，利用Western印迹法检测细胞中BLC-EGFP的酶切活性和稳定性，进一步利用该模型评价SRC激酶抑制剂KX2-391对BLC-EGFP蛋白胞内稳定性的影响。结果 成功构建重组表达质粒pEGFP-N1-BLC。质粒转染后，BCL-EGFP蛋白在Neuro-2a细胞中的表达水平随时间逐渐增加并具有酶切胞内底物囊泡相关蛋白-2(VAMP-2)的活性；质粒转染12 h后加入CHX终止蛋白合成，BLC-EGFP的胞内水平在72 h内无显著变化；加入KX2-391作用24 h后，可显著促进BLC-EGFP蛋白的胞内降解。结论 成功建立B型肉毒毒素轻链荧光表达细胞模型，为后续B型肉毒毒素轻链胞内持留机制研究和胞内解毒剂筛选提供了技术储备。