靶向DNA连接酶Ⅳ小分子抑制剂SCR7提升CHO-K1细胞定点整合效率研究

目的 应用DNA连接酶Ⅳ（Lig4）的小分子抑制剂SCR7处理中华仓鼠卵巢（CHO）-K1细胞，验证其能否提高CHO-K1细胞中由CRISPR/Cas9介导的外源基因在ROSA26安全位点的定点整合效率。方法 构建靶向CHO-K1细胞ROSA26位点的特异性pX330-sgRNA-ROSA26质粒以及带启动子失活的GFP报告基因同源打靶载体，摸索并确定SCR7在CHO-K1细胞内作用的适宜浓度及处理时间，通过流式细胞术检测SCR7对CHO-K1细胞定点整合效率，同时评价剂量范围内SCR7对细胞凋亡的影响。结果 在CHO-K1细胞中成功构建靶向ROSA26位点的GFP报告系统，该系统可用于验证CRISPR/Cas9介导的定点整合效率；确定了SCR7对CHO-K1细胞作用的合适剂量和处理时间，在该条件下SCR7对CHO-K1细胞无明显细胞毒性；证实了SCR7在剂量范围内能有效提升外源基因在CHO-K1细胞ROSA26位点的整合效率，且对细胞凋亡无明显影响。结论 SCR7能提升CHO-K1细胞定点整合效率，该发现为应用Lig4小分子抑制剂构建具备高效表达外源基因的重组CHO细胞系奠定了基础。