三磷酸腺苷结合盒亚家族G成员2基因促进乳腺癌细胞增殖与药物外排

目的 构建带Myc标签的三磷酸腺苷结合盒亚家族G成员2(ABCG2)基因的真核表达载体，并研究其生物学功能。方法 以人卵巢文库为模板，通过PCR方法扩增人的ABCG2基因，将其插入pXJ-40-myc载体上，经双酶切和基因测序确定后转染人ZR75-1乳腺癌细胞，通过Western印迹验证ABCG2蛋白表达；采用免疫荧光法检测细胞中ABCG2蛋白的定位；采用CCK-8法和划痕实验检测ABCG2基因对乳腺癌细胞增殖、迁移能力的影响；通过流式细胞术检测ABCG2基因对化疗药物米托蒽醌外排的影响。结果 在人卵巢文库中成功获取长约2000 bp的ABCG2基因，并构建在pXJ-40-myc载体上，测序结果与目的序列一致；质粒提取后转染人ZR75-1乳腺癌细胞；免疫荧光法结果表明，ABCG2蛋白主要在ZR75-1细胞的细胞膜和细胞质中表达；CCK-8法与划痕试验结果表明，转染pXJ-40-myc-ABCG2的乳腺癌细胞，与转染空载体质粒的细胞相比，增殖能力与迁移能力均提高；流式细胞术检测提示，ABCG2诱导细胞对米托蒽醌药物外排增多。结论 成功构建了pXJ-40-myc-ABCG2真核表达载体，并...