基于红色荧光蛋白的酵母双分子荧光互补技术的建立

目的 在酵母细胞中建立基于酵母增强型红色荧光蛋白（yEmRFP）的双分子荧光互补技术，用于直观地检测蛋白质相互作用。方法 利用分子克隆技术将yEmRFP的N端片段（1～159 aa,RN159）和C端片段（160～236 aa,RC160）分别与转录因子Jun和Fos的碱性亮氨酸拉链结构域（bZIP）—bJun和bFos或其缺失突变体bFosΔZip相融合，构建重组质粒，其中bFosΔZip与bJun不存在相互作用，可作为阴性对照组，将重组质粒转化酵母细胞后，通过营养缺陷培养基筛选转化成功的酵母菌落，利用荧光显微镜和流式细胞仪检测酵母中重组yEmRFP蛋白质的荧光信号，判定该技术是否可用于检测蛋白质相互作用。结果 成功构建了RN159和RC160与bJun和bFos或bFosΔZip相融合的重组质粒。酵母表达体系中bJun和bFos的相互作用使yEmRFP重新组装为完整荧光蛋白质，通过荧光显微镜检测到强的红色荧光信号，利用流式细胞仪藻红蛋白（PE）通道计数20 000个酵母细胞，其中约有25%酵母细胞具有红色荧光；而阴性对照组未检测到荧光信号，同样在流式细胞仪PE通道中未检测到明显的红...