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| 含pIRES2-EGFP-4-1BBL质粒减毒沙门氏菌株的构建与鉴定 | |
| 引用本文： | 叶建新,仉元亭,陈卫昌,张学光,任大明.含pIRES2-EGFP-4-1BBL质粒减毒沙门氏菌株的构建与鉴定[J].中国免疫学杂志,2009,25(4). |
| 作者姓名： | 叶建新 仉元亭 陈卫昌 张学光 任大明 |
| 作者单位： | 1. 苏州大学第一医院消化科,江苏省临床免疫重点实验室,苏州,215006 2. 苏州大学生物技术研究所,苏州,215007 3. 复旦大学遗传学研究所遗传工程国家重点实验室,上海,200433 |
| 基金项目： | 江苏省临床免疫重点实验室基金，江苏省自然科学基金，江苏省研究生科研创新基金 |
| 摘 要： | 目的:构建含pIRES2-EGFP-4-1BBL质粒的SL3261(减毒鼠伤寒沙门氏菌)疫苗菌.方法:将质粒pIRES2-EGFP-4-1BBL转入LB5000(鼠伤寒沙门氏菌)进行甲基化,利用修饰后重组质粒转化终宿主菌SL3261,抗生素筛选后挑取单个菌落扩增进行抽提质粒和PCR鉴定,SL3261疫苗菌与HepG2细胞体外共培养,荧光显微镜和RT-PCR分别检测GFP(绿荧光蛋白)的表达和4-1BBL基因的转录.结果:导入pIRES2-EGFP-4-1BBL质粒的SL3261经抽提质粒电泳后获得了同原转化质粒相同大小的目的条带,质粒PCR获得了约930 bp的条带,200个HepG2细胞感染SL3261为201±46 CFU、SL3261-pIRES2-EGFP为163±37,而SL3261-pIRES2-EGFP-4-1BBL为158±32,含质粒SL3261在体外感染HepG2细胞的能力同原细菌基本相同(P＞0.05).感染含质粒SL3261的HepG2细胞观察到GFP表达,感染含重组质粒SL3261的HepG2细胞经RT-PCR检测到约930 bp的目的条带.结论:成功构建了能携带大鼠4-1BBL基因真核表达质粒的SL3261疫苗菌. |
| 关 键 词： | 4-1BBL基因 减毒沙门氏菌 DNA疫苗 |
Construction and indentification of the recombinant vaccine of Attenuated Salmonella typhimurium containing pIRES2-EGFP-4-1BBL vector |
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| YE Jian-Xin,ZHANG Yuan-Ting,CHEN Wei-Chang,ZHANG Xue-Guang,REN Da-Ming.Construction and indentification of the recombinant vaccine of Attenuated Salmonella typhimurium containing pIRES2-EGFP-4-1BBL vector[J].Chinese Journal of Immunology,2009,25(4). | |
| Authors: | YE Jian-Xin ZHANG Yuan-Ting CHEN Wei-Chang ZHANG Xue-Guang REN Da-Ming |
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