禽流感病毒(H5N1)血凝素蛋白真核表达载体的构建与表达 |
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引用本文: | 张文帅,温恬,迟莹,李燕,焦永军.禽流感病毒(H5N1)血凝素蛋白真核表达载体的构建与表达[J].细胞与分子免疫学杂志,2012(1):91-93. |
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作者姓名: | 张文帅 温恬 迟莹 李燕 焦永军 |
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作者单位: | 卫生部肠道病原微生物重点实验室江苏省疾病预防控制中心病原微生物研究所 |
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基金项目: | 江苏省自然科学基金资助项目(BK2009431);江苏省卫生厅资助项目(H200857) |
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摘 要: | 目的:构建禽流感病毒(H5N1)血凝素蛋白HA真核表达载体并表达其编码蛋白(转染293T细胞)。方法:从江苏H5N1流感病毒毒株(A/Jiangsu/07-4(H5N1))提取病毒RNA,采用RT-PCR技术扩增HA全长基因,将其克隆至pMD18-T Vector中构建pMD18-T-HA质粒,双酶切pMD18-T-HA与PXJ40-MYC后,构建真核表达载体PXJ40-MYC-HA,经酶切及测序鉴定后将质粒转染到293T细胞中,通过West-ern blot鉴定HA蛋白的表达。结果:经双酶切、测序鉴定证实HA基因的真核表达载体构建成功。Western blot法可见HA基因编码蛋白的成功表达。结论:成功构建了H5N1血凝素真核表达载体,该表达载体的构建为后期建立稳定表达HA蛋白的细胞模型和HA蛋白功能研究奠定了基础。
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关 键 词: | 禽流感病毒 H5N1 HA 真核表达 免疫印迹 |
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