| VEGFR-2/KDR三区的载体构建、表达及胃癌患者抗-KDR抗体的检测 |
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| 引用本文： | 陈小波,黄锡全,张隆,谢爽,孙健,康向东.VEGFR-2/KDR三区的载体构建、表达及胃癌患者抗-KDR抗体的检测[J].检验医学,2007,22(2):155-158. |
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| 作者姓名： | 陈小波 黄锡全 张隆 谢爽 孙健 康向东 |
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| 作者单位： | 上海中医药大学附属普陀医院,上海,200062;江苏大学医学技术学院,江苏,镇江,212001 |
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| 基金项目： | 上海中医药大学附属普陀医院基金 |
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| 摘 要： | 目的扩增人血管内皮细胞生长因子受体-2／激酶插入受体（VEGFR-2／KDR）三区基因，构建表达载体，在大肠埃希菌中表达，获得纯化蛋白。检测胃癌术前患者外周血中抗-KDR抗体水平，为进一步研究KDR与抗-KDR抗体在胃癌中的作用奠定基础。方法从人血管内皮细胞株ECV304提取总RNA，逆转录后，聚合酶链反应（PCR）扩增KDR胞外段三区基因，连接到pMD18-T载体测序；酶切后将目的基因插入原核表达载体pET28α（＋）构建重组质粒，将重组质粒转化到大肠埃希菌DH5et内并提取质粒，经双酶切鉴定后，再转化入表达菌株BL21（DE3），异丙基-B-D硫化半乳糖苷（IPTG）诱导表达，用Ni^2＋-NTA树脂纯化、复性；用获得的蛋白包被酶联免疫吸附试验（ELISA）板，用ELISA检测32例胃癌患者和35名健康对照者外周血抗．KDR抗体水平。结果构建了表达载体pET28α（＋）-KDR3，并获得高效表达，表达的蛋白质相对分子质量为16000，重组蛋白以包涵体形式存在。胃癌患者外周血中抗-KDR抗体水平显著高于健康对照组（P〈0．01）。结论VEGFR-2／KDR三区基因成功克隆到表达质粒内并表达。为进一步研究KDR与抗-KDR抗体在胃癌中的作用奠定了基础，及可能为胃癌的血清学诊断提供新的方法。
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| 关 键 词： | 血管内皮细胞生长因子受体-2 克隆 表达 胃癌 抗-KDR抗体 |
| 文章编号： | 1673-8640(2007)02-0155-04 |
| 修稿时间： | 2006年8月9日 |
The cloning and expression of the third loop domain of VEGFR-2/KDR and the level of anti-KDR antibody in peripheral blood from patients with gastric cancer |
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| CHEN Xiaobo,HUANG Xiquan,ZHANG Long,XIA Hong,SUN Jian,KANG Xiangdong.The cloning and expression of the third loop domain of VEGFR-2/KDR and the level of anti-KDR antibody in peripheral blood from patients with gastric cancer[J].Laboratory Medicine,2007,22(2):155-158. |
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| Authors: | CHEN Xiaobo HUANG Xiquan ZHANG Long XIA Hong SUN Jian KANG Xiangdong |
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