| 腺相关病毒介导人骨形态发生蛋白7基因体外转染脂肪源性干细胞的研究 |
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| 引用本文： | 康焱,廖威明,盛璞义,张珑涓,原向伟,雷磊,黄保丁. 腺相关病毒介导人骨形态发生蛋白7基因体外转染脂肪源性干细胞的研究[J]. 中华创伤骨科杂志, 2006, 8(11): 1057-1061 |
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| 作者姓名： | 康焱 廖威明 盛璞义 张珑涓 原向伟 雷磊 黄保丁 |
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| 作者单位： | 1. 510080,广州,中山大学附属第一医院骨科
2. 510080,广州,中山大学附属第一医院普通外科实验室 |
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| 基金项目： | 广东省科委重点攻关项目(C30307) |
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| 摘 要： | 目的构建人骨形态发生蛋白7(hBMP7)基因重组腺相关病毒载体并观察其在脂肪源性干细胞(ADAS cells)中的表达,为骨组织工程探索新的基因治疗方法和细胞来源。方法以pcDNA1．1／Amp-hBMP7质粒为模板扩增,将回收的PCR产物片段克隆入pUC18载体,获得重组质粒pUC18-hBMP7。双酶切质粒pUC18-hBMP7、pSNAV,回收的两片段转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,获得重组质粒PSNAV-hBMP7。用重组Ⅰ型单纯疱疹病毒HSV1-rc／△UL2感染BHK-21细胞,裂解细胞收获病毒液。采用“氯仿处理-PEG／NaCl沉淀-氯仿抽提”三个步骤分离浓缩和纯化,测定病毒滴度。培养大鼠ADAS cells,并检测细胞表面标记物。在体外分别转染rAAV2-hBMP7和rAAV2-GFP,流式细胞仪、Western-blot方法检测转染基因的表达。结果PCR、酶切鉴定以及测序分析表明,BMP7基因成功克隆入质粒pSNAV-hBMP7载体中,并在BHK21细胞中成功包装出具有感染活性的重组腺相关病毒载体rAAV2-hBMP7。早期对ADAS cells的转染效率可达90％, Western-Blot方法检测到第1周与第8周的转染组细胞均有蛋白水平的表达。结论成功构建了hBMP7基因重组腺相关病毒载体和培养出大鼠ADAS cells,rAAV2-hBMP7载体在体外可高效转染大鼠ADAS cells。
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| 关 键 词： | 腺相关病毒 脂肪源性干细胞 人骨形态发生蛋白7 基因治疗 |
| 收稿时间： | 2006-05-27 |
| 修稿时间： | 2006-05-27 |
Gene transfer mediated through adeno-associated virus type 2 induces transgenic expression of bone morphogenetic protein-7 in adipose-derived adult stem cells in vitro |
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| KANG YAM, LIAO Wei-ming, SHENG Pu-yi,et al.. Gene transfer mediated through adeno-associated virus type 2 induces transgenic expression of bone morphogenetic protein-7 in adipose-derived adult stem cells in vitro[J]. Chinese Journal of Orthopaedic Trauma, 2006, 8(11): 1057-1061 |
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| Authors: | KANG YAM LIAO Wei-ming SHENG Pu-yi et al. |
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| Affiliation: | Department of Orthopaedics, The First Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University, Guangzhou 510080, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Adeno-associated virus Adipose-derived adult stem cell(ADAS cells) Human bone morphogenetic protein7 (HBMP7) Gene therapy |
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