| BALB/c小鼠I-Adαβ链编码基因真核双顺反子载体的构建及表达 |
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| 引用本文： | 高明,王海平,周勇,王全立.BALB/c小鼠I-Adαβ链编码基因真核双顺反子载体的构建及表达[J].中国免疫学杂志,2006,22(1):41-43. |
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| 作者姓名： | 高明 王海平 周勇 王全立 |
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| 作者单位： | 军事医学科学院野战输血研究所,北京,100850 |
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| 摘 要： | 目的：为了获取BALB／c小鼠I-A^d α、β链编码基因，构建真核双顺反子表达载体并在NIH3T3细胞中表达，建立BALB／c小鼠MHC-Ⅱ抗原递呈细胞研究模型。方法：采用Trizol提取BALB／c小鼠脾细胞总RNA，RT-PCR获取I-A^d αβ链cDNA，连接pGEMT载体测序，正确后亚克隆至plRES真核双顺反子表达载体；用Lipofectamine2000转染NIH3T3细胞，G418筛选转染克隆株。RT-PCR鉴定外源基因在mRNA水平的表达；流式细胞术（FCM）鉴定外源基因在蛋白质水平的表达以及在细胞表面展示的水平。结果：建立了BALB／c小鼠I-A^d αβ链编码基因真核双顺反子表达载体plRES-I-A^d αβ；plRES-I-A^d αβ转染NIH3T3细胞，在G418筛选下可获得高达72％的转染细胞；转染细胞总RNA RT-PCR显示外源基因在mRNA水平得到表达；FCM显示外源基因编码的蛋白高水平表达并定位于细胞表面。结论：为进一步研究BALB／c小鼠MHC-Ⅱ抗原递呈的分子机制奠定了基础。
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| 关 键 词： | 抗原递呈 BALB/c小鼠 I-Adαβ链 转染 NIH3T3细胞 |
| 文章编号： | 1000-484X（2006）01-0041-03 |
| 收稿时间： | 2004-09-28 |
| 修稿时间： | 2004-09-282004-11-26 |
Construction of pIRES-I-Adαβ and stable expression of BALB/c mouse I-Adαβ chain genes in NIH3T3 cell line |
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| GAO Ming,WANG Hai-Ping,ZHOU Yong,WANG Quan-Li.Construction of pIRES-I-Adαβ and stable expression of BALB/c mouse I-Adαβ chain genes in NIH3T3 cell line[J].Chinese Journal of Immunology,2006,22(1):41-43. |
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| Authors: | GAO Ming WANG Hai-Ping ZHOU Yong WANG Quan-Li |
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| Institution: | Beifing Institute of Transfusion, Beijing 100085, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | |
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