酪氨酸激酶在TNF-α诱导类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞MAPKs活化中的作用

目的 研究在类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（RA FLS）信号转导中，酪氨酸激酶在TNF－α刺激下丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases,MAPKs)活化中的作用。方法 原代培养类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞。应用Western blot检测TNF－α短时间内引起RA FLS蛋白质酪氨酸磷酸化状态改变，及其对MAPKs家族成员活化的浓度效应和时相特点；并应用genistein,酪氨酸激酶（PTK）抑制剂观察对MAPKs活化的抑制情况。结果 TNF－α可以瞬时引起RA FLS蛋白质酪氨酸磷酸化程度增加；并在短时间内激活MAPKs通路（ERK2、JNK2、P38）。不同浓度梯度TNF－α作用显示：10IU／ml时对ERK2、JNK2即可达到峰值活化，100IU／ml时P38达到最大活化。时间上，ERK2、JNK2、P38的活化分别在TNF－α作用后5min、15min、15min最明显；genistein对TNF－α诱导的ERK2活化抑制作用显著，而对于JNK2、P38的抑制则较弱。结论 TNF－α在RA FLS信号转导中，可以瞬时导致蛋白质酪氨酸磷酸化程度增加，并同时激活MAPKs 3条通路，但是对MAPKs 3个亚家族成员的活化具有异质性；PTK在TNF－α导致ERK活化中发挥作用，对JNK、P38活化无明显影响。