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| 人前列腺干细胞抗原的原核表达、纯化及鉴定 | |
| 引用本文： | 任杰,高江平,阎瑾琦,江乐,于继云. 人前列腺干细胞抗原的原核表达、纯化及鉴定[J]. 解放军医学杂志, 2010, 35(8) |
| 作者姓名： | 任杰 高江平 阎瑾琦 江乐 于继云 |
| 作者单位： | 1. 军事医学科学院基础医学研究所,北京,100850 2. 解放军总医院泌尿外科,北京,100853 3. 曲阜师范大学生命科学学院,山东曲阜,273165 |
| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划，国家自然科学基金 |
| 摘 要： | 目的 构建包含人前列腺干细胞抗原(PSCA)的原核表达质粒,并进行诱导表达、蛋白纯化及鉴定.方法 通过PCR扩增人PSCA基因片段,与过渡载体pGEM-T Easy连接后进行测序鉴定,鉴定正确后,将PSCA基因片段酶切并插入含有谷胱甘肽s-转移本科GST标签的原核表达载体pET42a,得到重组质粒pET42a-PSCA.将pET42a-PSCA转化大肠埃希菌BL21(DE3),在IPTG诱导下表达GST-PSCA融合蛋白,用Glutathione-Sepharose 4B柱对融合蛋白进行纯化,纯化产物进行SDS-PAGE及Western blotting鉴定.结果 PSCA基因的PCR产物大小与预期相符,测序结果与GenBank 中的PSCA序列一致.pET42a-PSCA原核表达质粒构建正确,SDS-PAGE及Western blotting检测显示融合蛋白诱导表达成功,分子量大小约为43kD.结论 成功构建了人PSCA的原核表达质粒,能在BL21菌株中表达,且纯化后得到较高纯度的GST-PSCA融合蛋白,为后续抗前列腺癌基因疫苗研究奠定了基础. |
| 关 键 词： | PSCA蛋白,人 质粒 重组融合蛋白质类 |
Prokaryotic expression, purification and identification of human prostate stem cell antigen |
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| REN Jie,GAO Jiang-ping,YAN Jin-qi,JIANG Le,YU Ji-yun. Prokaryotic expression, purification and identification of human prostate stem cell antigen[J]. Medical Journal of Chinese People's Liberation Army, 2010, 35(8) | |
| Authors: | REN Jie GAO Jiang-ping YAN Jin-qi JIANG Le YU Ji-yun |
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