热休克蛋白90α(HSP90α)在大肠杆菌中的表达 |
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作者姓名: | 乔绘红 赵玫 施一江 袁兴华 范云霞 周纯 徐枫 黄常志 |
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作者单位: | 1. 北京市东单三条5号医科院基础所病理室,北京,100005 2. 中国医学科学院中国协和医科大学肿瘤研究所,北京,100021 |
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基金项目: | 国家自然科学基金!资助项目 (批准号 3 9770 82 4) |
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摘 要: | 目的 :探讨热休克蛋白 90α的生物学功能 ,获得高质量及充足的HSP90α蛋白。方法 :采用PCR的方法扩增HSP90αcDNA5’端 42 4bp片段 ,在起始密码子位置制造一个NcoI酶切位点 ,将PCR产物克隆到中间载体 ,再通过合适的酶切位点将其余片段连接到此载体 ,形成一个带有NcoI突变位点的HSP90αcDNA全长克隆。最终将HSP90α全部编码cDNA插入到pET 16b表达载体中。结果 :经诱导表达 ,SDS PAGE凝胶电泳分离显示在分子量大约 83kD处有一诱导蛋白带。WesternBlot证明表达产物与抗HSP90α抗血清有特异的免疫反应。结论 :构建成了T7启动子控制下的HSP90α表达质粒。
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关 键 词: | 热休克蛋白90α 基因表达 大肠杆菌 |
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