| 丝氨酸331是蛋白激酶C诱导血栓素α受体磷酰化和脱敏的主要部位(英文) |
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| 引用本文： | 严奉祥,YAMAMOTO Shuichi,TAIHsin-Hsiung,廖端芳.丝氨酸331是蛋白激酶C诱导血栓素α受体磷酰化和脱敏的主要部位(英文)[J].中国药理学报(英文版),2002(10). |
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| 作者姓名： | 严奉祥 YAMAMOTO Shuichi TAIHsin-Hsiung 廖端芳 |
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| 作者单位： | 南华大学药物药理研究所，Department of Pediatrics，Saga Medical School，Saga，Japan，College of Pharmacy，University of Kentucky Lexington，KY 40536-0082，USA，南华大学药物药理研究所 衡阳，中国 421001，衡阳，中国 421001 |
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| 基金项目： | Project supported in part by a grant from the National Insti-tutes of Health of USA(HL-46296)and in part by a grant from the National Major Basic Research Program(973)(G2000056905). |
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| 摘 要： | 目的:检测人类血栓素α受体(TPα)C端丝氨酸/苏氨酸残基的各种两氨酸诱变体作为PKC底物的能力,以确定被PKC磷酸化和脱敏的特异的丝氨酸/苏氨酸残基.方法:为了易于鉴定被磷酰化的细胞内区段,使用甘胱甘肽S-转移酶(GST)-细胞内区段融合蛋白作纯化的PKC底物,然后突变磷酰化蛋白的cDNA,以找出TPα被PKC磷酰化的主要部位,并将有组氨酸尾野生型或诱变型血栓素受体α稳定地转移到人类胚胎肾(HEK)293细胞,以研究该受体的磷酸化和脱敏.结果:仅C-端能充当纯化PKC底物.丝氨酸-331(mP4)被显示强的磷酰化,丝氨酸-324(mP1)则轻微磷酰化,丝氨酸-329(mP3)则微弱磷酰化,而其它丝氨酸/苏氨酸残基没被发现磷酰化.佛被醇-12-肉豆蔻酸酯-13-乙酸盐(PMA)诱导表达野生型TPα的HEK 293细胞磷酰化.然而不能显示触发表达丝氨酸331丙氨酸诱变受体的HEK 293受体磷酸化.用PMA预处理表达野生型受体的HEK 293细胞能抑制I-B0P诱导Ca~(2 )释放,然而用PMA预处理表达诱变受体的细胞不能中止I-BOP抑制Ca~(2 )释放.结论:丝氨酸331是TPαa磷酰化和脱敏的主要和关键部位.
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| 关 键 词： | 血栓素受体 定点诱变 丝氨酸 蛋白激酶C 磷酰化 |
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