当归ISSR-PCR反应体系的建立优化及引物筛选 |
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引用本文: | 李硕,李敏,卢道会,李文博,邓元宝.当归ISSR-PCR反应体系的建立优化及引物筛选[J].时珍国医国药,2015(2):373-376. |
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作者姓名: | 李硕 李敏 卢道会 李文博 邓元宝 |
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作者单位: | 成都中医药大学;甘肃中医学院;四川农业大学 |
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基金项目: | 国家“十二五”科技支撑计划课题(No.2011BAI05B02);甘肃省自然科学基金(No.1212RJZA080) |
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摘 要: | 目的建立并优化当归的ISSR-PCR反应体系,并进行引物筛选。方法以当归基因组DNA为模板,通过单因素实验研究了ISSR反应体系中主要成分(Taq DNA聚合酶、d NTP、模板、引物)以及热循环参数(退火温度、退火时间、变性时间、延伸时间、循环数)对扩增结果的影响。结果找出了各自的最适条件,建立了适合当归ISSR分析的反应体系和扩增程序,即在20μl反应体系中,内含10×Taq Buffer(含1.5 mmol·L-1Mg Cl2)、1.25U Taq DNA聚合酶、250μmol·L-1d NTP、40 ng模板、0.25μmol·L-1引物。扩增程序为94℃预变性5 min,然后进行35个循环:94℃变性30 s,(根据引物的退火温度)复性30 s,72℃延伸150 s,循环结束后72℃延伸7 min,-4℃保存。结论以此体系为基础进行引物筛选,在100条ISSR引物中筛选出17条扩增条带清晰、多态性较高、重复性好的引物。该研究为当归药材DNA鉴定、种质资源研究以及优良品种选育奠定了基础。
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关 键 词: | 当归 ISSR 反应体系 引物筛选 |
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