| 小分子干扰RNA转染猪血管内皮细胞优化体系的建立 |
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| 引用本文： | 朱珉,曹荣华,祁洪刚,王璐,胡枫,陈栋,刘斌,陈刚,张伟杰,陈实. 小分子干扰RNA转染猪血管内皮细胞优化体系的建立[J]. 中华器官移植杂志, 2008, 29(2) |
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| 作者姓名： | 朱珉 曹荣华 祁洪刚 王璐 胡枫 陈栋 刘斌 陈刚 张伟杰 陈实 |
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| 作者单位： | 华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所国家教育部、卫生部器官移植重点实验室,武汉,430030 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划(973计划)，国家自然科学基金杰出青年科学基金 |
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| 摘 要： | 目的 探索建立高效、稳定的小分子干扰RNA(SiRNA)转染方案并建立优化的猪血管内皮细胞RNA干扰(RNAi)转染体系.方法 针对猪α1,3-半乳糖苷转移酶(α1,3-GT)基因合成数对SiRNA分子,运用不同转染体系(DOSPA、RiboJuice及Lipofectamine 2000)转染永生化猪血管内皮细胞系(PED).分别应用流式细胞术、台盼蓝拒染试验及乳酸脱氢酶释放试验评价干扰α1,3-GT作用下PED的α1,3-半乳糖残基(α-Gal)表达情况以及SiRNA-脂质体转染对PED生长的影响.结果 PED能有效发生特异性RNA干扰现象,且呈明显的剂量依赖性特征.SiRNA-1与脂质体RiboJuice在12 nmol/L∶6 μl时,干扰效果最佳(67.3%～89.5%),整体量效优于DOSPA及Lipofectamine 2000转染体系.靶细胞转染SiRNA-1后48 h时的α-Gal相对表达水平为10.5%,而SiRNA-2转染组则未见明显干扰现象.脂质体转染体系在转染后6～12 h对靶细胞生长稍有影响,24 h后细胞活性逐渐恢复.结论 猪血管内皮细胞存在RNA干扰机制,RiboJuice转染体系是一种高效、低毒的SiRNA转染方式,为研究RNAi在抑制异种排斥反应中的应用奠定了基础.
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| 关 键 词： | RNA干扰 半乳糖苷酶类 内皮细胞 |
Establishment of an optimized small interfering RNA transfection system for porcine endothelial cells |
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