抗赭曲霉毒素A单克隆抗体的制备及其ELISA检测方法的建立

目的制备抗赭曲霉毒素A（OA）的单克隆抗体（McAb）并对其进行初步鉴定，在此基础上建立竞争抑制酶联免疫吸附试验（ELISA）用于OA的检测。方法采用小剂量长周期的免疫方案，以OA 牛血清白蛋白（BSA）偶联物免疫雌性BALB/c小鼠，采用细胞融合法获得分泌抗OA的McAb的杂交瘤细胞株,用竞争抑制ELISA法进一步检测McAb的特异性，腹水诱生法大量制备McAb，以OA为竞争抗原，建立检测OA的竞争抑制ELISA。结果OA BSA免疫的BALB/c小鼠血清效价为1:512?000，与BSA有强烈的交叉反应。细胞融合后，ELISA筛选抗体分泌阳性的杂交瘤细胞株，抗OA BSA的McAb与BSA的交叉反应率仅为3.5%，对分泌抗OA BSA特异的McAb的细胞株经3轮克隆化，抗体分泌阳性率达到100%，建立了1株能稳定分泌抗OA BSA McAb的杂交瘤细胞株，竞争抑制法进一步证明了该抗体是特异针对OA的，腹水诱生法制备了大量的McAb。竞争抑制ELISA线性范围为0.24～125?ng/mL，线性方程y=-0.113?2logx+0.901?6，相关系数r=0.98，最低检出浓度为0.24?ng/mL。样品的加标回收率为97.07%～107.83%。结论获得了分泌抗OA的McAb的杂交瘤细胞株，建立了OA检测的简单、灵敏、高效的ELISA检测方法。