| 酵母双杂交筛选胎肾上腺cDNA文库中HNP-1结合蛋白 |
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| 引用本文： | 杜润滋,邓璐霞,黄宁,罗朝志. 酵母双杂交筛选胎肾上腺cDNA文库中HNP-1结合蛋白[J]. 现代预防医学, 2011, 38(18): 3723-3726,3729 |
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| 作者姓名： | 杜润滋 邓璐霞 黄宁 罗朝志 |
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| 作者单位： | 1. 四川大学华西医院麻醉科,成都,610041
2. 四川大学华西医学中心感染与免疫教研室 |
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| 基金项目： | CMB基金，自然科学基金 |
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| 摘 要： | [目的]筛选胎肾上腺cDNA文库中与α防御素HNP-1成熟肽具有相互作用的蛋白分子。[方法]通过聚合酶链反应(PCR)成功获得HNP-1成熟肽基因插入酵母表达载体pGBK-T7中构建诱饵质粒,同时提取胎肾上腺RNA,SMART技术制备人胎肾上腺cDNA文库,并采用Matchmaker LexA酵母双杂交系统从胎肾上腺cDNA文库中筛选与HNP-1成熟肽相互作用的蛋白。最后通过PCR筛选获得阳性克隆并测序,而后经回转实验,GST pull down以及免疫共沉淀再次验证两者的相互作用关系。[结果]成功构建诱饵质粒pGBKT7-HNP-1以及胎肾上腺cDNA文库并在酵母细胞中正确表达,筛选获得HNP-1成熟肽相互作用的蛋白-melanocortin 2 receptor (ACTH-R),CCAAT-enhancer-bind-ing proteins(C/EBP),Tramembrane trafficking protein(TMP21),low density lipoprotein receptor-related protein 6(LRP6)。最终选定促肾上腺皮质激素受体(ACTH-R)作为主要研究对象,且经GST pull down以及免疫共沉淀实验获得了证实两者间具有相互作用的相应的条带。[结论]从胎肾上腺cDNA文库中成功筛选得到α防御素HNP-1成熟肽相互作用蛋白——促肾上腺皮质激素受体。
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| 关 键 词： | α防御素 HNP-1 成熟肽 酵母双杂交 胎肾上腺cDNA文库 促肾上腺激素受体 |
SCREENING THE GENE SEQUENCES OF THE INTERACTION PROTEINS OF HNP-1 FROM HUMAN FETAL ADRENAL CDNA LIBRARY BY YEAST TWO HYBRID SYSTEM |
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| DU Rui-zi,DENG Lu-xia,HUANG Ning,et al.. SCREENING THE GENE SEQUENCES OF THE INTERACTION PROTEINS OF HNP-1 FROM HUMAN FETAL ADRENAL CDNA LIBRARY BY YEAST TWO HYBRID SYSTEM[J]. Modern Preventive Medicine, 2011, 38(18): 3723-3726,3729 |
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| Authors: | DU Rui-zi DENG Lu-xia HUANG Ning et al. |
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| Affiliation: | DU Rui-zi,DENG Lu-xia,HUANG Ning,et al.(Department of Anesthesia,West China Hospital,Sichuan University,Chengdu 610041,China) |
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| Abstract: | |
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