甘草黄酮A对低氧条件下胃癌细胞增殖和糖酵解的影响

目的 探讨低氧条件下甘草黄酮A对胃癌细胞增殖和糖酵解的影响。方法 筛选人胃癌AGS细胞予以5% O₂低氧环境培养48 h，分为5组：常氧组、低氧组、甘草黄酮A高、中、低浓度组（100、50、25 μmol·L^-1）。细胞增殖与活性检测（CCK-8）法和克隆形成实验检测甘草黄酮A对低氧条件下AGS细胞增殖的影响；划痕实验检测细胞迁移情况，蛋白免疫印迹法 （Western blot） 和实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR） 检测AGS细胞中低氧诱导因子-1α（HIF-1α）、葡萄糖转运蛋白1 （GLUT1）、乳酸脱氢酶A（LDHA）、丙酮酸激酶M2（PKM2）、己糖激酶Ⅱ（HK2）的蛋白及mRNA表达水平。试剂盒检测葡萄糖摄取和HK的活性的表达情况。结果 CCK-8法实验结果表明，与低氧组比较，24 h时，甘草黄酮A高、中浓度组AGS细胞的增殖率显著降低（P<0.01），48 h时，甘草黄酮A高、中、低浓度组AGS细胞的增殖率显著降低（P<0.01）。克隆形成实验结果表明，与常氧组比较，低氧组AGS细胞克隆形成数显著升高（P<0.01）；与低氧组比较，甘草黄铜A高、中、低浓度组AGS细胞的克隆形成数显著降低（P<0.01）。划痕实验表明，与常氧组比较，低氧组的AGS细胞迁移的能力升高（P<0.01）；与低氧组比较，甘草黄酮A高、中、低浓度组的AGS细胞各个时间段迁移细胞的能力显著降低（P<0.01）。Real-time PCR表明，与常氧组比较，低氧组GLUT1、LDHA、PKM2和HK2 mRNA明显升高（P<0.05，P<0.01）；与低氧组比较，甘草黄酮A高浓度组GLUT1、LDHA、PKM2、HK2 mRNA，甘草黄酮A中浓度组GLUT1、LDHA、HK2 mRNA、甘草黄酮A低浓度组HK2 mRNA明显降低（P<0.05，P<0.01）。Western blot表明，与常氧组比较，低氧组HIF-1α、GLUT1、LDHA、PKM2和HK2蛋白的表达明显升高（P<0.05，P<0.01）；与低氧组比较，甘草黄酮A高浓度组的HIF-1α、GLUT1、LDHA、PKM2和HK2蛋白的表达明显降低（P<0.05，P<0.01），甘草黄酮A中、低浓度的HK2蛋白的表达明显降低（P<0.05，P<0.01）。试剂盒检测葡萄糖摄取及HK活性结果表明，与常氧组比较，低氧组葡萄糖的摄取和HK的含量表达升高（P<0.01），与低氧组比较，甘草黄酮A高浓度组葡萄糖的摄取和HK的含量表达及甘草黄酮A中浓度组HK的含量表达降低（P<0.01）。结论 甘草黄酮A可以抑制低氧条件下AGS细胞的增殖，其作用机制可能与抑制胃癌的糖酵解有关。

Effect of Licoflavone A on Proliferation and Glycolysis of Gastric Cancer Cells Under Hypoxic Conditions