基于Akt/mTOR通路研究地榆皂苷II诱导肝癌细胞凋亡和自噬作用机制

目的 探讨地榆皂苷II抑制肝癌细胞增殖、诱导肝癌细胞凋亡和自噬的作用机制。方法 采用不同浓度（0、10、20、40 μmol/L）地榆皂苷II处理人肝癌HepG2细胞和小鼠肝癌Hepa1-6细胞，通过CCK-8和EdU实验观察地榆皂苷II对HepG2和Hepa1-6细胞增殖的影响；运用流式细胞术检测地榆皂苷II对细胞凋亡的影响；通过Western blotting检测地榆皂苷II对细胞凋亡和自噬相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（cysteine-aspartic acid protease-3，Caspase-3）、Caspase-8、Caspase-9、B细胞淋巴瘤2（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2-associated X protein，Bax）、cleaved Caspase-3、微管相关蛋白1A/1B-轻链3-II（microtubule-associated protein light chain3-II，LC3II）、微管相关蛋白1A/1B-轻链3-Ⅰ（microtubule-associated protein light chain3-Ⅰ，LC3Ⅰ）、自噬相关蛋白p62、Beclin1及蛋白激酶B（protein kinase B，Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）通路关键蛋白表达的影响。结果 地榆皂苷II显著抑制HepG2和Hepa1-6细胞活力，且呈现一定的剂量相关性；流式细胞检测发现地榆皂苷II给药后细胞凋亡率显著增加（P＜0.01、0.001）；Western blotting结果显示，与对照组比较，地榆皂苷II给药后Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bcl-2表达显著降低（P＜0.05、0.01、0.001），cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达显著升高（P＜0.05、0.01），LC3Ⅱ/LC3I值显著升高（P＜0.05、0.01、0.001），Beclin1蛋白表达量显著升高（P＜0.05、0.01），p62蛋白表达量显著下降（P＜0.05、0.01），p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR值显著降低（P＜0.05、0.01、0.001）。结论 地榆皂苷II通过Akt/mTOR通路诱导HepG2和Hepa1-6细胞自噬和凋亡实现对肝癌细胞增殖的抑制，为抗肝细胞癌新药发现提供药理学证据。

Mechanism of ziyuglycoside II on apoptosis and autophagy in hepatocellular carcinoma cells based on Akt/mTOR pathway