| 变形链球菌CH43变链素Ⅰ基因片段的克隆及表达 |
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| 引用本文： | 石馨,倪龙兴,田宇,邝容. 变形链球菌CH43变链素Ⅰ基因片段的克隆及表达[J]. 实用口腔医学杂志, 2005, 21(3): 339-342 |
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| 作者姓名： | 石馨 倪龙兴 田宇 邝容 |
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| 作者单位： | 西安第四军医大学口腔医学院牙体牙髓病学教研室,710032 |
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| 基金项目： | 陕西省科技基金 2004k11-G3(3) |
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| 摘 要： | 目的:获得编码变形链球菌CH43变链素Ⅰ前体肽基因片段,并诱导其在不杀伤工程菌的前提下高效表达。方法:用PCR技术从变形链球菌CH43基因库中扩增出编码变链素Ⅰ成熟肽mutA基因片段相应大小的DNA片段,将片段与pMD18 T载体连接后测序。将测序正确的mutA按照BamHⅠ和HindⅢ酶切位点克隆入原核表达载体pProEX,将连接产物转化入E.coliDH5α,挑出阳性克隆,IPTG诱导表达重组的6×His融合蛋白。以IPTG浓度、A600值、诱导时间各梯度优化表达。结果:PCR获得的mutA序列与GenBank报道的一致(为147bp)。优化了诱导条件使重组载体在E.coliDH5α中高效表达,融合蛋白经SDS PAGE,在相对分子质量为5. 7×103处有特异的蛋白条带,在A600为1. 666时,加入IPTG至终浓度为1. 0mmol/L,诱导6h,目的蛋白表达量最高,占菌体总蛋白量的20%左右。结论:成功克隆变形链球菌CH43变链素ⅠmutA基因片段,并在E.coliDH5α中高效表达。
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| 关 键 词： | 变形链球菌 龋病 变链素 mutA 克隆 表达 |
| 文章编号： | 1001-3733(2005)-03-0339-04 |
| 修稿时间： | 2004-10-11 |
Cloning of mutA and expression of its coding protein |
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| Shi Xin,Ni Longxing,Tian Yu,et al.. Cloning of mutA and expression of its coding protein[J]. Journal of Practical Stomatology, 2005, 21(3): 339-342 |
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| Authors: | Shi Xin Ni Longxing Tian Yu et al. |
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| Affiliation: | Shi Xin,Ni Longxing,Tian Yu,et al.Department of Conservative Dentistry,College of Stomatology,The Fourth Military Medical University,Xi'an 710032,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Streptococcus mutan Dental caries Mutacin mutA Cloning Expression |
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