妊娠期高血压疾病患者胎盘组织叶酸代谢基因MTR 的表达水平及其作用机制研究

目的 研究叶酸代谢相关基因甲硫氨酸合成酶(methionine synthase，MTR) 在妊娠期高血压疾病患者胎盘组织中的差异表达以及对于人绒毛滋养层细胞HTR8 迁移及侵袭能力调控的机制研究。方法 2018 年1 月～ 2020 年12 月在成都市龙泉驿区妇幼保健院分娩的30 例妊娠期高血压，28 例子痫前期和20 例重度子痫前期患者及25 例正常产妇作为研究对象，分娩时采集研究对象胎盘组织。使用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR detecting system,qPCR)及蛋白质印迹法(western blotting,WB) 检测了各组胎盘组织中MTR，上皮型钙黏附蛋白(E-Cadherin,E-Cad)，锌指E 盒结合蛋白-1(zinc finger E-box binding protein1,ZEB1) 基因转录及蛋白表达情况。进一步通过siRNA 敲减人绒毛滋养层细胞HTR8 中MTR 基因的表达，研究MTR 对于E-Cadherin 和ZEB1 基因的调控作用。通过Transwell 迁移及侵袭实验验证敲减MTR 后对于HTR8 细胞迁移和侵袭的影响。结果 与对照组相比，随着妊娠期高血压疾病分期的进展，子痫前期与重度子痫前期患者胎盘组织中E-Cadherin 的表达增加（1.14±0.35, 1.53±0.41 vs 1.00±0.30），胎盘组织中MTRmRNA 的表达量逐渐增加（1.72±0.17, 2.58±0.13 vs 1.00±0.33），妊娠期高血压疾病患者胎盘组织中ZEB1 的表达量下降（0.48±0.10, 0.13±0.06 vs 1.00±0.22），差异具有统计学意义（F=13.28，67.1，65.41，均 P ＜ 0.01）。随着疾病分期进展，MTR 及E-Cadherin 的蛋白表达量明显增加，而ZEB1 的蛋白表达量明显降低。siRNA 可以显著抑制HTR8中MTR 基因mRNA 的表达，敲低MTR 基因后可显著抑制上皮相关标志物E-Cadherin 基因mRNA 的表达, 可以显著促进间充质相关标志物ZEB1 基因mRNA 的表达，差异具有统计学意义（t=5.906，6.715，9.777, 均 P ＜ 0.01）。敲减HTR8 细胞中MTR 基因可显著促进迁移能力，侵袭实验结果显示敲减MTR 基因可促进HTR8 细胞的侵袭能力，差异具有统计学意义（t=6.241，22.37, 均 P ＜ 0.01）。结论 妊娠期高血压疾病患者胎盘组织中MTR 基因表达上调， MTR可通过调节HTR8 细胞EMT 相关基因E-Cadherin，ZEB1 表达，从而抑制其迁移及侵袭能力。MTR 可能成为妊娠期高血压疾病潜在的治疗靶点之一。

Expression Level and Effects of Folate Metabolism-related Gene MTR in Placenta of Patients with Hypertensive Disorder Complicating Pregnancy