miR-335 通过下调Fra-1 表达抑制人乳腺癌细胞增殖机制的实验研究

目的　探讨微小核糖核酸（microRNA，miR）-335 对人乳腺癌细胞增殖能力的影响，以及其可能存在的机制。方法　体外培养乳腺癌细胞及正常乳腺组织细胞，检测miR-335 及Fros 相关抗原1(fros related antigent-1,Fra-1) 的表达量；体外转染miR-335 mimics 后，通过细胞活力检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8) 检测细胞的增殖能力，检测Fra-1 的表达变化及下游细胞增殖相关蛋白分子基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase-9，MMP-9）、血管内皮生长因子C(vascular endothelial growth factor- C,VEGF-C) 的表达量；生物信息学预测及双荧光霉素报告基因验证Fra-1 为miR-335作用靶基因。结果　乳腺癌细胞中miR-335 的表达量（0.755±0.034）低于正常乳腺细胞（1.495±0.029），Fra-1 蛋白的表达量（2..347±0.120）高于正常乳腺细胞（1.319±0.038），差异均有统计学意义（t=0.075，4.191, 均P ＜ 0.001）。转染miR-335 mimic 后48，72 h 乳腺癌细胞增殖能力（0.881±0.062，0.887±0.082）低于对照组细胞（1.326±0.051，1.493±0.038），差异均有统计学意义（t=44.096，59.307, 均P ＜ 0.001）；转染miR-335 mimic 后乳腺癌细胞中Fra-1的蛋白表达量（0.567±0.091）低于未转染细胞（2.347±0.204），差异有统计学意义（t=3.763, P<0.001）；转染miR-335 mimic 后细胞中MMP-9（0.469±0.027），VEGF-C（0.540±0.041）的蛋白表达量低于对照组（0.958±0.058，1.024±0.171），差异均有统计学意义（t=1.953，7.856, 均P ＜ 0.001）；荧光霉素报告基因实验结果显示miR-335 下调Fra-1 启动子核心转录区域（-164 ～ -52nt）的转录活性。结论　miR-335 通过抑制MMP-9 和VEGF-C 的表达，并下调Fra-1 启动子转录活性，抑制了体外乳腺癌细胞的增殖。

Research of miR-335 Inhibited Proliferation of Human Breast Cancer Cells by Down-Regulated Fra-1 Expression