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| 人PKM2基因克隆、表达及纯化的研究 | |
| 引用本文： | 王秋香,刘会玲,祝秉东,李海红,王千千,王海琳.人PKM2基因克隆、表达及纯化的研究[J].实用妇产科杂志,2013,29(4):270-273. |
| 作者姓名： | 王秋香 刘会玲 祝秉东 李海红 王千千 王海琳 |
| 作者单位： | 1. 兰州大学第一临床医学院,甘肃兰州,730000 2. 甘肃省人民医院,甘肃兰州,730000 3. 兰州大学结核病研究中心,甘肃兰州,730000 |
| 基金项目： | 甘肃省应用技术研究与开发项目 |
| 摘 要： | 目的:构建人PKM2(M2-type pyruvate kinase)的原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达,镍离子柱亲和层析法纯化融合蛋白.方法:用PCR方法从宫颈癌Hela细胞全基因组中扩增出目的基因PKM2,通过克隆载体pET30a(+)构建质粒载体pET30a(+)-PKM2.经双酶切和DNA测序证实正确后,用Ni-NTA亲和层析柱进行纯化.结果:双酶切鉴定所切下的片段大小与理论值相符,测序结果和报道一致.经SDS-PAGE分析,纯化后的蛋白约在58 KDa位,条带单一,无杂带出现.结论:成功表达纯化了PKM2融合蛋白,为肿瘤疫苗研制和肿瘤标志物快速诊断的研究奠定基础. |
| 关 键 词： | PKM2 克隆 表达 纯化 |
Cloning, Expression and Purification of M2-type Pyruvate Kinase Gene |
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| Keywords: | |
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