| PKH26标记结合活体荧光成像技术在椎间盘组织工程研究中的应用 |
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| 引用本文： | 伍耀宏,徐宝山,杨强,李秀兰,张杨,马信龙,夏群,张春秋,许海委,曾超.PKH26标记结合活体荧光成像技术在椎间盘组织工程研究中的应用[J].中国修复重建外科杂志,2013(2):207-211. |
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| 作者姓名： | 伍耀宏 徐宝山 杨强 李秀兰 张杨 马信龙 夏群 张春秋 许海委 曾超 |
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| 作者单位： | 天津医院脊柱外科;天津医院骨科研究所细胞工程室;天津理工大学机械工程学院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(81272046、31000432);中国博士后科学基金资助项目(2011M500530、2012T50221);天津市卫生局科技基金重点资助项目(2010KR08)~~ |
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| 摘 要： | 目的体外评估PKH26标记对山羊髓核细胞生物学功能的影响,并结合活体荧光成像系统评价种子细胞在裸鼠体内的生物学行为。方法取1岁龄山羊椎间盘分离髓核组织,通过酶消化法获取原代细胞,倒置相差显微镜下观察,传代获取第1代髓核细胞,行PKH26荧光标记,荧光显微镜下观察标记后的细胞荧光强度,并行甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色观察,锥虫蓝染色比较标记前后细胞活性,MTT法检测标记前后细胞增殖特性,实时荧光定量PCR检测细胞Ⅰ、Ⅱ型胶原及蛋白聚糖基因表达。将标记后的髓核细胞接种至一体化纤维化-髓核支架的髓核部分,纤维环部分作为阴性对照,体外培养3 d后植入5只6周龄雄性裸鼠体内,培养6周后活体成像技术检测髓核细胞-支架复合物在体内的荧光强度及范围。结果倒置相差显微镜观察示原代髓核细胞簇状生长,呈卵圆形,第1代髓核细胞呈类软骨样细胞形态;标记后的第1代髓核细胞甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色均呈阳性;标记后荧光强度均匀,标记前后细胞活性均在95%以上;标记前后细胞生长曲线比较差异无统计学意义(P>0.05);实时荧光定量PCR检测示标记前后细胞Ⅰ、Ⅱ型胶原和蛋白聚糖基因相对表达量差异均无统计学意义(P>0.05)。活体成像技术显示体内髓核支架有强烈荧光,纤维环支架未见荧光。结论 PKH26标记对髓核细胞的活性、增殖及细胞表型的表达无明显影响,结合体内活体荧光成像系统可以追踪细胞在体内的生物学行为。
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| 关 键 词： | 椎间盘组织工程 PKH26 活体荧光成像技术 山羊 |
APPLICATION OF PKH26 LABELING COMBINED WITH IN VIVO IMAGING TECHNOLOGY IN INTERVERTEBRAL DISC TISSUE ENGINEERING |
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| WU Yaohong,XU Baoshan,YANG Qiang,LI Xiulan,ZHANG Yang,MA Xinlong,XIA Qun,ZHANG Chunqiu,XU Haiwei,ZENG Chao.APPLICATION OF PKH26 LABELING COMBINED WITH IN VIVO IMAGING TECHNOLOGY IN INTERVERTEBRAL DISC TISSUE ENGINEERING[J].Chinese Journal of Reparative and Reconstructive Surgery,2013(2):207-211. |
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| Authors: | WU Yaohong XU Baoshan YANG Qiang LI Xiulan ZHANG Yang MA Xinlong XIA Qun ZHANG Chunqiu XU Haiwei ZENG Chao |
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| Institution: | 1. 1Deapartment of Spinal Surgery, 2Cell Engineering Laboratory of Orthopaedic Institute, Tianjin Hospital, Tianjin, 300211, P.R.China; 3School of Mechanical Engineering, Tianjin University of Technology. |
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| Abstract: | |
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