| ILKmRNA在结肠癌细胞株中的表达及其稳定表达的RNA干扰载体构建 |
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| 引用本文： | 杨凤武,梁后杰. ILKmRNA在结肠癌细胞株中的表达及其稳定表达的RNA干扰载体构建[J]. 中国肿瘤, 2007, 16(4): 275-278 |
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| 作者姓名： | 杨凤武 梁后杰 |
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| 作者单位： | 第三军医大学附属西南医院,重庆,400038 |
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| 摘 要： | [目的]检测结肠癌细胞株中ILK的mRNA水平，并构建针对ILK基因的特异性RNA干扰（RNAi）表达载体。[方法]通过RT—PCR检测ILK基因在三种结肠癌细胞株（SW480、LO—VO及HT29）mRNA的表达：根据GenBank提供的ILK基因mRNA序列，设计具有小发夹结构的两条DNA序列，化学合成后经退火形成双链DNA片段，连接到经HindⅢ／BglⅡ酶切线性化的pSUPER—neo—EGFP／H1（pSNE／H1）质粒上，形成重组载体pSNE—ILK，转化大肠杆菌DH5d，提取质粒经HindⅢ／EcoRⅠ双酶切鉴定和测序鉴定，稳定转染结肠癌细胞HT29。[结果]①RT—PCR检测．ILK基因在三种结肠癌细胞株中均有表达，ILK／β-actin电泳条带强度比：SW480为0．63，HT29为0．65，LO-VO为0.33。②成功构建了针对ILK基因的特异性RNA干扰载体pSNE—ILK和对照的无关基因载体pSNE-Control，并稳定转染结肠癌细胞株HT-29。[结论]成功构建了针对ILK基因的特异性RNAi载体．并稳定转染HT29细胞，能有效抑制ILK基因，为下一步探讨ILK基因在结肠癌进程中的作用和结肠癌的基因治疗奠定了基础。
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| 关 键 词： | RNA干扰 载体构建 整合素连接激酶 |
| 文章编号： | 1004-0242（2007）04-0275-04 |
| 收稿时间： | 2006-11-22 |
| 修稿时间： | 2006-11-222007-01-17 |
Expression of ILK mRNA in Colon Carcinoma Cell Lines and Construction of ILK-RNAi Stable Expressing Vector |
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| YANG Feng-wu,LIANG Hou-jie. Expression of ILK mRNA in Colon Carcinoma Cell Lines and Construction of ILK-RNAi Stable Expressing Vector[J]. CHINA CANCER, 2007, 16(4): 275-278 |
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| Authors: | YANG Feng-wu LIANG Hou-jie |
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| Affiliation: | Southwest Hospital, Third Military Medical University, Chongqing 400038, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | RT-PCR |
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