松果菊苷对高糖诱导的人肾小管上皮细胞上皮间质转化及纤维化的影响

目的:研究松果菊苷(ECH)对高糖诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)转分化及纤维化的影响,探讨松果菊苷改善肾纤维化的机制。方法:取对数期生长的HK-2细胞分组:正常对照组(NC,5. 5 mmol/L的D-葡萄糖)、渗透浓度对照组(OSM,5. 5 mmol/L的D-葡萄糖+24. 5 mmol/L甘露醇)、高糖组(HG,30 mmol/L的D-葡萄糖)、低松果菊苷组(E-L,30 mmol/L的D-葡萄糖+125μmol/L松果菊苷)、高松果菊苷组(E-H,30 mmol/L的D-葡萄糖+250μmol/L松果菊苷)。RT-PCR和Western Blot检测各组HK-2细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),Ⅲ型胶原蛋白(CollagenⅢ),纤维连接蛋白(Fn),转化生长因子β1(TGF-β1),Smad3及Smad2的mRNA和蛋白质表达水平;细胞免疫组化法检测Fn和α-SMA的阳性表达。结果:ECH对HK-2细胞增殖的影响:不同浓度的ECH(125,250μmol/L)分别处理HK-2细胞48 h后,相较于空白对照组,差异均无统计学意义(P>0. 05),提示ECH对HK-2细胞增殖活性无影响。高糖处理48 h时:①HG组HK-2细胞中α-SMA、CollagenⅢ、Fn、TGF-β1、Smad3及Smad2的mRNA和蛋白表达水平均显著高于NC组(P<0. 05);②相较于NC组,OSM组细胞相关上述指标的变化均无统计学意义(P>0. 05),即高浓度渗透压对HK-2细胞无显著作用;③相较HG组,ECH处理后的各浓度组HK-2细胞α-SMA、CollagenⅢ、Fn、TGF-β1、Smad3及Smad2的mRNA和蛋白表达量均显著降低(P<0. 05);各浓度组间比较,相较于E-L组,E-H组HK-2细胞α-SMA、CollagenⅢ、Fn、TGF-β1、Smad3及Smad2的mRNA和蛋白表达水平显著下降(P<0. 05)。结论:松果菊苷可减少α-SMA、CollagenⅢ及Fn的产生,抑制高糖诱导的HK-2细胞上皮间质转化及纤维化;松果菊苷可通过下调TGF-β1、Smad3及Smad2的表达,抑制TGF-β1/Smads信号通路,从而逆转肾纤维化,延缓糖尿病肾病的发展。

Effect of echinacoside against high glucose-induced epithelial mesenchymal transition and fibrosis in human renel tubular epithelial cells