流式细胞术检测白细胞糖皮质激素受体-α方法的建立

目的建立流式细胞术检测糖皮质激素受体-α的方法。方法使用细胞破膜剂处理EDTA·2K抗凝外周静脉血,获得已被破膜的白细胞。将纯化的兔抗人GR-α多克隆抗体与之反应,再与FITC标记的羊抗兔二抗反应,比较在不同抗体反应浓度(0.0004～0.004μg/μL)、不同的反应条件(室温、37℃及4℃)下获得的阳性细胞率及荧光强度,并比较标本处理前后放置不同时间的检测结果。最后作重复性试验。结果以一抗浓度为0.004μg/μL时荧光信号最强,但一抗浓度为0.0004～0.004μg/μL获得的结果无统计学差异。一抗在室温或者37℃孵育30min或者4℃反应6h,结果无统计学差异。标本可于4℃保存至24h处理。标本处理后最好及时检测,随时间延迟荧光信号有所下降。重复性试验显示阳性细胞百分率及荧光强度的CV值分别为3.4%与9.8%。结论建立了稳定可靠的糖皮质激素受体-α流式细胞术检测的方法。