| 大鼠硫酸软骨素蛋白多糖基因shRNA慢病毒载体的构建及干扰效率鉴定*☆ |
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| 引用本文： | 王萍,刘成,方岩,杨凯,田学愎,田玉科.大鼠硫酸软骨素蛋白多糖基因shRNA慢病毒载体的构建及干扰效率鉴定*☆[J].中国神经再生研究,2011,15(15):2735-2738. |
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| 作者姓名： | 王萍 刘成 方岩 杨凯 田学愎 田玉科 |
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| 作者单位： | 华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学研究室，湖北省武汉市 430030,华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学研究室，湖北省武汉市 430030,华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学研究室，湖北省武汉市 430030,华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学研究室，湖北省武汉市 430030,华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学研究室，湖北省武汉市 430030,华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学研究室，湖北省武汉市 430030 |
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| 基金项目： | 课题受国家自然科学基金资助项目(30872441)资助 |
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| 摘 要： | 背景：最近研究发现硫酸软骨素蛋白多糖(NG2)在中枢神经系统中参与多种生理病理功能，慢病毒载体可感染分裂期细胞或非分裂期的细胞，并能在细胞内高效稳定的表达。
目的：构建大鼠源性NG2基因shRNA慢病毒载体并检测其干扰效率。
方法：选择大鼠NG2基因RNA干扰的靶序列，合成Oligo DNA，退火形成双链DNA，与Hpa Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切后的pFU-GW-RNAi载体连接产生pLV-NG2-RNAi，PCR筛选阳性克隆，测序鉴定。将重组载体与pHelper 1.0载体、pHelper 2.0载体通过lipofectamineTM 2000共转染293T细胞包装产生慢病毒LV-NG2-RNAi，收集病毒上清并浓缩。采用孔稀释滴度测定法计算病毒滴度。将LV-NG2-RNAi慢病毒感染C6细胞，于感染后96 h提取细胞总蛋白，采用Western blot检测NG2的表达。
结果与结论：经PCR和测序证实构建片段大小及DNA序列与目的序列一致，实验成功构建大鼠NG2基因shRNA慢病毒载体LV-NG2-RNAi。包装浓缩慢病毒的滴度为8×1011 TU/L。Western blot检测显示在感染复数为50时，感染LV-NG2-RNAi慢病毒的C6细胞较感染对照慢病毒及未感染细胞NG2的表达明显降低，干扰效率可达100%(P < 0.05)。结果证实了实验成功构建大鼠NG2基因shRNA慢病毒载体，且该载体能够在细胞水平有效沉默靶基因。
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| 关 键 词： | 硫酸软骨素蛋白多糖 RNA干扰 慢病毒 感染 细胞 |
Construction and identification of a lentiviral vector for RNA interference of rat chondroitin sulfate peoteoglycan gene |
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| Wang Ping,Liu Cheng,Fang Yan,Yang Kai,Tian Xue-bi and Tian Yu-ke.Construction and identification of a lentiviral vector for RNA interference of rat chondroitin sulfate peoteoglycan gene[J].Neural Regeneration Research,2011,15(15):2735-2738. |
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| Authors: | Wang Ping Liu Cheng Fang Yan Yang Kai Tian Xue-bi and Tian Yu-ke |
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| Institution: | Department of Anesthesiology, Tongji Hospital of Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030, Hubei Province, China,Department of Anesthesiology, Tongji Hospital of Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030, Hubei Province, China,Department of Anesthesiology, Tongji Hospital of Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030, Hubei Province, China,Department of Anesthesiology, Tongji Hospital of Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030, Hubei Province, China,Department of Anesthesiology, Tongji Hospital of Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030, Hubei Province, China,Department of Anesthesiology, Tongji Hospital of Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030, Hubei Province, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | NG2 RNA interference lentiviral vector infection cell |
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