| 应用抑制性消减杂交技术克隆乙型肝炎病毒前-S1蛋白反式激活的相关基因 |
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| 引用本文： | 纪冬,成军,王建军,董菁,郭江,刘妍,杨倩,党晓燕,王春花.应用抑制性消减杂交技术克隆乙型肝炎病毒前-S1蛋白反式激活的相关基因[J].胃肠病学和肝病学杂志,2004,13(1):3-8. |
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| 作者姓名： | 纪冬 成军 王建军 董菁 郭江 刘妍 杨倩 党晓燕 王春花 |
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| 作者单位： | 100039,北京,解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心 |
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| 基金项目： | 军队回国留学人员启动基金资助课题(98H038),国家自然科学基金攻关项目(C030114020,C30070689),军队"九、五"科技攻关项目(98D063),军队"十、五"科技攻关青年基金项目(01Q138),军队"十、五"科技攻关项目(O1B135) |
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| 摘 要： | 目的 应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建乙型肝炎病毒(HBV)前-S1蛋白(pre-S1)反式激活的相关基因cDNA消减文库,克隆前-S1反式激活相关基因,以期发现前-S1蛋白反式激活作用的靶位点,为阐明前-S1蛋白的反式激活作用的分子生物学机制,以及HBV相关肝细胞癌(Hcc)形成的分子生物学机制开辟新的研究方向。方法以HBV前-S1表达质粒pcDNA3．1(-)-preS1转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3．1(-)为对照;制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,经RsaⅠ酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,将产物与pGEM-Teasy载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌DH5a进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析。结果文库扩增后得到67个阳性克隆,经菌落PCR分析,得到51个200～1000bp插入片段。对所得片段测序,并进行同源性分析,获得32种编码基因,其中26个为已知功能基因,另外6个为未知功能序列,可能是前-S1蛋白反式激活新的靶基因。结论成功构建HBV前-S1反式激活的相关基因cDNA消减文库,为今后进一步分析、研究病毒蛋白的致病机制奠定基础。为进一步阐明前-S1蛋白反式调节作用及其在HBV感染中的分子生物学机制提供理论依据和研究方法。
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| 关 键 词： | 抑制性消减杂交技术 克隆 乙型肝炎病毒 前-S1蛋白 反式激活 分子生物学 |
| 修稿时间： | 2003年12月10 |
Cloning of genes transactivated by pre-S1 protein of hepatitis B virus using suppression subtractive hybridization technique |
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| JI Dong,CHENG Jun,WANG JianJun,et al Gene Therapy Research Center.Cloning of genes transactivated by pre-S1 protein of hepatitis B virus using suppression subtractive hybridization technique[J].Chinese Journal of Gastroenterology and Hepatology,2004,13(1):3-8. |
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| Authors: | JI Dong CHENG Jun WANG JianJun Gene Therapy Research Center |
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| Institution: | JI Dong,CHENG Jun,WANG JianJun,et al Gene Therapy Research Center,Institute of Infectious Diseases,The 302 Hospital of PLA,Beijing 100039,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Hepatitis B virus Pre S1 protein Transactivation |
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